培 養(yǎng) 基

培養(yǎng)基是用來供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)，促使細(xì)胞增殖，也是細(xì)胞賴以生長(zhǎng)的環(huán)境。

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中用量最多的就是細(xì)胞培養(yǎng)基，雖然細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)大同小異，但是每種細(xì)胞的培養(yǎng)條件卻相差甚遠(yuǎn)。若偏離某種細(xì)胞所需的培養(yǎng)條件，則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞表達(dá)不同的表型。

培養(yǎng)基按照來源分類：在動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，可使用天然培養(yǎng)基（Natural Medium）或是合成培養(yǎng)基（Synthetic/Artificial Medium）。

天然培養(yǎng)基

源于動(dòng)物體液或組織分離提取，營(yíng)養(yǎng)成分豐富且各項(xiàng)條件與體內(nèi)環(huán)境相似，所以培養(yǎng)效果佳，但是由于來源于動(dòng)物，成分復(fù)雜，且批間差較大。

合成培養(yǎng)基

是由高純度化學(xué)成分（無機(jī)鹽、氨基酸、維生素、含碳物質(zhì)等）與純水配制而成，所有成分都是確定且可知其確切含量的。合成培養(yǎng)基根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠挚煞譃槿�種：

• 短時(shí)間保存細(xì)胞活性

  即各類平衡鹽溶液，具有特定的pH和滲透壓；能維持細(xì)胞離開生物體后幾小時(shí)內(nèi)的活性。

• 延長(zhǎng)細(xì)胞存活時(shí)間

  即基礎(chǔ)培養(yǎng)基，在平衡鹽溶液中添加各種有機(jī)化合物或血清，配合適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)操作條件，可將細(xì)胞培養(yǎng)至多代。

• 特殊功能

  即特殊培養(yǎng)基，根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?誘導(dǎo)分化、增殖等要求，將基礎(chǔ)培養(yǎng)基額外添加各類因子的特殊培養(yǎng)基。

目前，合成培養(yǎng)基憑借成分明確且種類繁多等特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)占據(jù)市場(chǎng)主導(dǎo)地位，也是研究人員的首要選擇。

合成培養(yǎng)基成分與功能

培養(yǎng)基一般含有氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、含碳物質(zhì)和其他營(yíng)養(yǎng)元素，每種成分對(duì)于細(xì)胞存活、代謝等功能都有不同影響，不同細(xì)胞系需要的成分含量也不同，因此市面上會(huì)存在各類培養(yǎng)基配方。

因培養(yǎng)基種類繁多，因而，我們只簡(jiǎn)單列舉了幾種常見基礎(chǔ)培養(yǎng)基為大家進(jìn)行介紹。

01 DMEM

Dulbecco's Modified Eagle Medium（DMEM）是目前最常使用的改良式Eagle's培養(yǎng)基。DMEM與MEM含有相同的營(yíng)養(yǎng)成分，但濃度高出2~4倍。主要用于快速生長(zhǎng)的細(xì)胞，分低糖（1000 mg/L）、高糖（4500 mg/L）兩種。DMEM含更高濃度的NaHCO₃，要用10%的CO₂來平衡，當(dāng)然也可以在較低CO₂濃度下使用。

DMEM-高糖（標(biāo)準(zhǔn)型）更適合高密度懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。適用于附著性較差，但又不希望它脫離原來生長(zhǎng)點(diǎn)的克隆培養(yǎng)，也可用于雜交瘤中骨髓瘤細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)。 

DMEM-低糖（標(biāo)準(zhǔn)型）適于依賴性貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，特別適用于生長(zhǎng)速度快、附著性較差的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。

02 RPMI-1640

RPMI-1640營(yíng)養(yǎng)成分比較簡(jiǎn)單，比DMEM少一點(diǎn)糖和谷光甘肽，廣泛應(yīng)用于許多種正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞、特殊造血細(xì)胞、正�；驉盒栽錾�的白細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞以及HCT-15上皮細(xì)胞等均可參考使用。

03 DMEM/F12

F12培養(yǎng)基成分豐富，含有多種微量元素，和DMEM以1:1結(jié)合，稱為DMEM/F12培養(yǎng)基，作為無血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ)，利用了F12含有較豐富的成分和DMEM含有較高濃度的營(yíng)養(yǎng)成分為優(yōu)點(diǎn)。

該培養(yǎng)基適用于血清含量較低條件下哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。為了增強(qiáng)該培養(yǎng)基的緩沖能力，可以在DMEM/F12（1:1）中加入15 mM HEPES緩沖液。

04 McCoy's 5A

McCoy's 5A Medium最早是用于肉瘤細(xì)胞的培養(yǎng)所設(shè)計(jì)，可支持多種（如骨髓、皮膚、肺和脾臟等）的原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。除適于一般的原代細(xì)胞培養(yǎng)外，主要用于作組織活檢培養(yǎng)、一些淋巴細(xì)胞培養(yǎng)以及一些難培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)支持。

05 M-199

M-199培養(yǎng)基由Morgan等人研制，是第一個(gè)具有確定化學(xué)成分的細(xì)胞培養(yǎng)液，原本是用來研究雞胚原代細(xì)胞。除BSS（平衡鹽溶液）外，含有53種成分，為全面培養(yǎng)基，此培養(yǎng)液必須輔以血清才能支持長(zhǎng)期培養(yǎng)。主要用于雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)。M-199可用于培養(yǎng)多種種屬來源的細(xì)胞，并能培養(yǎng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，廣泛用于病毒學(xué)、疫苗生產(chǎn)。

06 MEM

Minimal Essential Medium是最基本的培養(yǎng)基, 設(shè)計(jì)之初是為了培養(yǎng)HeLa細(xì)胞以及部分哺乳類的成纖維細(xì)胞。MEM含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素，適合多種細(xì)胞單層生長(zhǎng)。以MEM為基礎(chǔ)，Stanner利用Earle's Balanced Salts和非必需胺基酸（NEAA）進(jìn)一步配制成MEM-Alpha培養(yǎng)基，可廣泛用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)。

好啦，本期介紹就到這里了

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