無論單細胞還是多細胞都是以細胞分裂的方式產(chǎn)生新的細胞,進行增殖,用來補充體內(nèi)衰老或死亡的細胞。
細胞增殖的研究方法有很多,主要包括:BrdU,EdU,CCK8等方法。其中EdU檢測方法是最新的細胞增殖檢測方法。
①試劑盒檢測細胞代謝活性(基于mtt、cck-8等)
mtt(噻唑藍):通過添加四咪唑鹽到細胞中可進行線粒體內(nèi)酶代謝活性的測定。活細胞能將四咪唑鹽(如mtt、xtt、wst-1)還原成藍紫色的甲瓚或甲瓚鹽(formazan),可通過分光光度計或酶標儀進行檢測。
ScienCell MTT檢測試劑盒
MTT法又稱MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲臜(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲臜,用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經(jīng)濟.
cell counting kit╟8 (cck-8)中的wst-8被細胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的橙色甲舎染料能夠溶解在組織培養(yǎng) 基中,生成的甲舎量與活細胞數(shù)量成正比。該試劑盒可適用于96孔板培養(yǎng)的貼壁或懸浮細胞。
②dna的合成的檢測(基于brdu的免疫法或edu的點擊化學法),可通過體內(nèi)成像、微孔板或流式細胞術(shù)檢測 等多種技術(shù)進行細胞示蹤。
dna的新組裝合成是細胞生長的必要條件,故經(jīng)常被用來進行細胞增殖、細胞活力及凋亡的檢測。brdu及edu,都是胸腺嘧啶的非放射性類似物,能摻入增殖細胞的dna中,可通過對brdu及edu的檢測,從而對dna的合 成量進行測定。
③ edu(5-ethynyl-2’- deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物,能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶(t)滲 入正在復制的dna分子中,通過基于edu與apollo®熒光染料的特異性反應快速檢測細胞dna復制活性,適用于細 胞增殖、細胞分化、生長與發(fā)育、dna修復、病毒復制、細胞標記示蹤等方面的研究,尤其適合進行sirna、mirna、小分子化合物及其他藥物的篩選實驗。