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如何避免支原體污染的應(yīng)對(duì)策略詳解

瀏覽次數(shù):5222 發(fā)布日期:2019-8-12  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),
發(fā)現(xiàn)細(xì)胞增殖變慢、
形態(tài)漸漸改變,
是血清或培養(yǎng)基的問(wèn)題嗎?
很有可能是你的細(xì)胞污染了~~~~~

支 原 體 污 染
細(xì)胞污染可分為細(xì)菌、霉菌、酵母菌、支原體污染,其中支原體污染發(fā)生的概率>50%。支原體(Mycoplasma) 是最小的原核生物,約0.1-0.3μm,可穿透0.22-0.45 μm 過(guò)濾膜 (BI血清經(jīng)過(guò)3次0.1μm濾膜并且檢測(cè)支原體)。
支原體污染棘手的原因之一是沒(méi)有如其他污染源“立即可辨”的現(xiàn)象,支原體污染侵襲細(xì)胞但是并不一定致死。如果您的細(xì)胞出現(xiàn)如下?tīng)顟B(tài):增殖變慢、形態(tài)變差、培養(yǎng)液變黃但是沒(méi)有渾濁,說(shuō)明您的細(xì)胞可能正遭受支原體的摧殘!


受支原體污染的293T              正常無(wú)污染的293T
 
支 原 體 檢 測(cè)
怎么知道您的細(xì)胞正遭受支原體摧殘呢,常見(jiàn)的檢測(cè)方法幾種:
1.分離培養(yǎng)法
將可疑樣本接種到支原體培養(yǎng)基中,觀察菌落生成。缺點(diǎn):培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng),須3~5周才能判斷。
2.DNA熒光染色法
利用熒光染劑 (Bisbenzimide, Hoechst 33258) 檢測(cè)支原體污染,但若有些細(xì)胞易有熒光背景,可能會(huì)干擾結(jié)果判讀。
3.PCR法
利用特異性引物,經(jīng)PCR反應(yīng)檢測(cè)支原體DNA,靈敏且快速。
BI EZ-PCR支原體檢測(cè)試劑盒:采用PCR法,簡(jiǎn)化了細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的檢測(cè)過(guò)程,可檢測(cè)出細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)的支原體污染。
試劑盒中包含獨(dú)特的反應(yīng)混合液,以及PCR中需要的所有試劑。使用者只需備有樣品,最后產(chǎn)物跑完膠后,如有一個(gè)270bp的片段,則代表有支原體污染,整個(gè)檢測(cè)過(guò)程耗時(shí)約4小時(shí)。


 
支 原 體 污 染 處 理
細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)的支原體污染為6種: 發(fā)酵支原體(M.fermentans),唾液支原體(M.salivarum),口腔支原體(M.orale),精氨酸支原體(M.arginini),豬鼻支原體(M.hyorhinis),萊氏無(wú)膽甾原體(A.laidlawii)等,有些是動(dòng)物來(lái)源,有些是人來(lái)源,支原體沒(méi)有細(xì)胞壁,所以使用青霉素等破壞細(xì)胞壁類(lèi)藥物不具效用,建議使用專(zhuān)為支原體開(kāi)發(fā)的處理試劑保護(hù)您珍貴的細(xì)胞。

支原體污染處理試劑:
BIOMYC-1 Antibiotic Solution 100X,貨號(hào):03-036-1B/C/D。
BIOMYC-2 Antibiotic Solution 100X,貨號(hào):03-037-1B/C/D。
BIOMYC-1 需BIOMYC-2按先后聯(lián)合使用。                                 
BIOMYC-3 Antibiotic Solution 100X,貨號(hào):03-038-1B/C/D。

上述處理試劑可去除90%以上實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的支原體污染 (支原體非單一物種,無(wú)單一試劑能100%去除支原體污染),不具細(xì)胞毒性,方法非常便捷。
 

支 原 體 污 染 預(yù) 防
俗話說(shuō),預(yù)防勝于治療,所以操作的器材與環(huán)境消毒也至關(guān)重要:
1.超凈工作臺(tái)預(yù)防
BI也提供Pharmacidal (貨號(hào): IC-110100)作為相應(yīng)的處理試劑,Pharmacidal可有效預(yù)防真菌(和孢子),細(xì)菌(和孢子),支原體和病毒 (包括HIV和Hepatitis B) 的生長(zhǎng)和污染。Pharmacidal成分為四苯甲基化合物,可生物降解,無(wú)毒,無(wú)刺激,對(duì)一般的工作臺(tái)和器材表面沒(méi)有任何損傷。不需稀釋?zhuān)看问褂贸瑑艄ぷ髋_(tái)前或每天噴灑一次臺(tái)面,二氧化碳培養(yǎng)箱每?jī)芍芤淮螄姙⑾,噴灑后讓其自然風(fēng)干,無(wú)需擦拭。


 

2.水盤(pán)為維持培養(yǎng)箱濕度所必需,但也成為潛在的污染源
BI的 Aquaguard-1 (貨號(hào): 01-867-1B 100ml, 稀釋100倍使用) 消毒水盤(pán)效果非常好,而且不會(huì)腐蝕不銹鋼,無(wú)毒,不揮發(fā)。
3.其他實(shí)驗(yàn)室的水浴環(huán)境也容易造成污染
BI的Aquaguard-2 (貨號(hào): 01-916-1E 50ml, 稀釋500倍使用),可以有效消毒任何形式的水浴環(huán)境。


 

Anyway,
科研路漫漫,
支原體君常相伴,
還是要做好預(yù)防和及時(shí)地檢測(cè),
給細(xì)胞安全的成長(zhǎng)環(huán)境


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