C57/BL6 小鼠中的競爭性骨髓移植實驗簡述
瀏覽次數(shù):11350 發(fā)布日期:2019-3-5
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造血干細胞 (HSC) 能夠分化形成血液系統(tǒng)的全部細胞,是維持血液系統(tǒng)所必需的細胞。造血干細胞是一種多能干細胞,具有自我更新的能力,并能夠通過層次過程生成各種血細胞系統(tǒng)的中期細胞,從而再生成機體血細胞。
為研究干細胞龕,研究人員必須能夠確定在受控條件下細胞群生成成體細胞系統(tǒng)的能力。實驗中采用的典型策略是將富含 HSC 的骨髓移植到受體小鼠血液系統(tǒng)之中,而受體小鼠的血液系統(tǒng)經亞致死劑量照射后人為清除。在這些小鼠中,成體血細胞以及干細胞、前體細胞均將在 照射 2 周后死亡。經過移植的細胞可以分化新的血液系統(tǒng),從而解救小鼠。HSC 可基于其短期 (ST- HSC)、長期 (LT-HSC) 以及中期 (IT- HSC) 重建能力實現(xiàn)再次分裂 。在大多數(shù)報告中,研究人員確定 LT-HSC 的方式是:在移植術后 16-44 周的不同時間點,對其生成循環(huán)單核細胞、粒細胞和淋巴細胞的能力進行測定。對移植后細胞進行的第一次競爭性分析應在移植術后 4-6 周予以完成。
在移植研究中,通常采用野生型近交 C57/BL6 小鼠,但前提是:這些小鼠攜帶Ptprcb 白細胞標記
(CD45.2/Ly5.2) 等位基因。Sloan Kettering 研究所 通過回交 SJL 小鼠與野生型 C57/BL6 小鼠的方式,培養(yǎng)出了一種被稱為 C57BL/6-Ly5.1 的同類品系小鼠。這些小鼠攜帶 Ptprcb 白細胞標記 (CD45.1/Ly5.1) 等位基因。使用常用的抗 CD45.1 和 CD45.2抗體,研究人員可以輕松鑒定宿主和移植細胞,并確定 HSC 在競爭性實驗中發(fā)揮的作用。
在本文中,我們概括性地描述了一項簡單的實驗,這項實驗的具體內容是:對經照射小鼠進行移植后,對其外周血中Cd45.2- 供體與 CD45.1- 宿主白細胞進行測定。