高效液相色譜儀“堵”的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，最主要原因就是流動相里有雜質(zhì)，雜質(zhì)的主要來源就是細(xì)菌,“堵”的原因之一：配制流動相時細(xì)菌污染。即使是有些固態(tài)微粒雜質(zhì)，也能在液相流路系統(tǒng)最前端的過濾頭上排除，真正容易引起問題的，是水中的細(xì)菌。新制備的純水在室內(nèi)放置幾天就會長菌，而這些細(xì)菌雖然肉眼不可見，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙，造成柱子很快報廢。這就是在配制流動相時造成的細(xì)菌污染的原因，解決它的方法很簡單，就是確保水的可靠性。

   在發(fā)生“堵”的現(xiàn)象后，就需要找出原因，主要是什么位置發(fā)生了“堵”。注意，絕大多數(shù)情況下，整個系統(tǒng)只會有一個地方發(fā)生堵塞。查堵的方法是從尾向前逆向分段拆開，仔細(xì)觀察壓力數(shù)值，如果某一個部件(柱子除外)裝上和拆下時的壓力差別很大，可發(fā)展變化判斷。

　　常見問題的有以下幾種：

　　(1)在更換零件時選擇的型號有誤，接口不是很匹配，在擰緊的時候產(chǎn)生變形，而使得管路堵塞。

　　(2)樣品處理液凈化得不干凈，長期會在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。

　　(3)在使用手動六通閥時，有些人可能由于手勁小的原因，轉(zhuǎn)動的不到位，于是造成流路形成了死堵，壓力快速升高超過警戒值。

　　(4)在使用金屬管路作出廢液管時，應(yīng)當(dāng)注意最好廢液瓶中先放一些水，并把廢液管的出口端放在液面下。如果位于在液相上且實驗使用較高濃度的緩沖鹽溶液，在停機時可能在出口端結(jié)晶成塊并造成堵塞。

　　下面再談一下“漏”的問題 ， “漏”則分兩種：漏液和漏氣

　　一.漏液

　　液相色譜儀從流動相瓶到廢液瓶之間的流路是一個全封閉體系，內(nèi)部壓力很高，但外部卻能保證一滴不漏。如果某個部件發(fā)生了漏液，那就是故障所在，漏液的原因分兩種：

　　( 1 )接觸硬件不當(dāng) ：

　　在更換零件如流路管或換柱時，換的接頭接口不匹配，造成漏液。選用PEEK接頭是一個較好的解決方法，不僅通用性好，而且靠手?jǐn)Q就能保證不漏液，即使是接口本身是匹配的，但是，如果操作不當(dāng)也會漏液，一種不當(dāng)就是力度把握不好，擰得太緊或太松。

　　( 2 )使用儀器不當(dāng) ：

　　如果是輸送泵漏液，最常見的原因就是在活塞位置緩沖鹽析出造成，析出的原因有兩個 ： 一是使用緩沖鹽溶液時突然加入了純甲醇而析出，這種錯誤很容易避免，這是盡量不要用純的甲醇和純水。只要互相有10%的比例就不會出現(xiàn)這個問題。另一原因是在用緩沖鹽溶液作流動相時，實驗結(jié)束后沒有換甲醇水沖洗，使得微滲的流動相干燥形成晶體造成。檢測器漏液是個很麻煩的事，一般都是吸收池的問題，更換的費用相當(dāng)高。但是并不是說一定要馬上更換，還可以從實際實驗效果看能否湊合使用。

　　二.漏氣

　　漏液是從內(nèi)部向外漏，而漏氣則是外部的氣體進入液相色譜儀的流路內(nèi)部形成了氣泡。下面按流路的方向逐個部件分析產(chǎn)生氣泡的原因和相應(yīng)解決方法 ：

　　(1)過濾頭抽液時，在流路管中有不規(guī)則但持續(xù)的小氣泡產(chǎn)生，這時考慮的是流動相有沒有脫氣，如果已經(jīng)脫了氣，則要注意過濾頭的污染也會造成這種現(xiàn)象。處理方法比較簡單，擰下過濾頭在稀硝酸中浸泡，超聲半小時，洗凈后裝回去即可。

　　( 2 )透明流路管

　　指的是在過濾頭和輸送泵之間的那一段管路。這一個部分往往不是有點氣泡，而經(jīng)常是整個管中全是空氣而操作人員卻渾然不知，以致輸送泵工作了半天才發(fā)現(xiàn)流動相瓶里的液體一點也沒少。這也是我們常說的液相色譜儀至少一周要開機一次的原因。如果長時間不用，這一段管路的液體會徹底干掉，而充滿空氣的管路和充滿液體的管路不仔細(xì)看是分辨不出的。這種情況對于輸送泵很危險，因為，泵從設(shè)計來說是輸送液體而不是氣體，內(nèi)部的液體對于活塞來說起到了機油的作用，如果活塞桿上還殘存了一些緩沖鹽，則極易拉傷，造成不可逆轉(zhuǎn)的影響。解決方法，用外力使管路中充滿液體，具體如下：

　　1.找到流路管進入輸送泵的接頭;

　　2.擰下來;

　　3.用一干凈的洗耳球的尖端對準(zhǔn)管路的平整切口;

　　4.吸液體，看液面從流動相瓶里上升，至離洗耳球5厘米左右時停止該動作;

　　5.快速把接頭擰回輸送泵上。

　　6.開機，打開排液閥門，啟動輸送泵;

　　7.等排液管中流出的溶液沒有氣泡時，再關(guān)閉排液閥，儀器正常工作。