關(guān)鍵詞

氣相色譜；電子捕獲檢測器；氯霉素

引言

氯霉素（Chloramphenicol， CAP） 是一種廣泛使用的廣譜類抗生素， 由于它對人體具有嚴(yán)重的毒副作用 [1]， 醫(yī)學(xué)界至今還沒有確定氯霉素的人體安全接觸劑量。 美國和歐盟都禁止在食用性動(dòng)物和動(dòng)物飼料中使用氯霉素 [2]， 在法規(guī)中CAP 的殘留量為不得檢出。

氣相色譜的 ECD 檢測器對于具有強(qiáng)電子親和力的化合物有較高的靈敏度， 而本實(shí)驗(yàn)采用 Thermo Scientific Trace1310 氣相色譜，在分析飼料中的氯霉素時(shí)，簡單、 方便，重現(xiàn)性好。

實(shí)驗(yàn)材料

儀器與試劑

Trace 1310 氣相色譜儀， 配備了 SSL（分流 / 不分流進(jìn)樣口），ECD( 電子捕獲檢測器 )；
自動(dòng)進(jìn)樣器： AS 1310
色譜工作站： Chromeleon 7.2
氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品（99.5%）； 衍生化試劑： 三氟雙（三甲基硅烷基） 乙酰胺（BSTFA） + 三甲基氯硅烷（TMCS）（99:1，美國 SUPELCO 公司） C18 固相萃取柱（美國 SUPELCO 公司），填料 300mg； 乙酸乙酯， 正己烷， 甲醇， 乙腈均為色譜純，氯化鈉為分析純。
樣品： 購自山東豬飼料

實(shí)驗(yàn)方法

1. 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

電子天平準(zhǔn)確稱取 10.0mg 氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品， 色譜純甲醇溶解定容到 100ml， 充分搖勻， 配制成 100ug/ml 的標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)備液， 置于 4℃冰箱中保存。 制作工作曲線時(shí)， 再取此儲(chǔ)備液用甲醇配制成其他濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2. 樣品預(yù)處理方法 [3]：

2.1 提取

稱取飼料 5.00g 左右， 置于 50ml 塑料離心管內(nèi)， 加入 40ml乙酸乙酯， 蓋好密封蓋于渦旋混合器上混合 2min， 超聲提取 20min。 離心機(jī)上 4000r/min 離心分離 4min， 取上清液20.0ml， 用氮?dú)獯抵两�干�?待凈化。

2.2 液液萃取凈化

稱取 4.0g 氯化鈉加水溶解定容到 100ml， 配制 4% 的氯化鈉溶液。 取 20ml 甲醇加 4% 的氯化鈉溶液 80ml， 配制成氯化鈉甲醇溶液。 用氯化鈉甲醇溶液 2ml 分三次溶解殘?jiān)�，均轉(zhuǎn)移到一個(gè) 15ml 的具塞離心管中， 加 4ml 正己烷， 渦旋混合 2min。 然后 4000r/min 離心 4min， 吸取上層正己烷棄去，重復(fù)上述操作一次。 水相加乙酸乙酯 3ml， 混合 2min，4000r/min 離心 4min， 吸取上層乙酸乙酯， 同樣的步驟重復(fù)兩次。 然后氮?dú)獯蹈桑?用 3ml5% 的乙腈 - 水溶解， 待柱凈化。

2.3 固相萃取柱凈化

準(zhǔn)備好 C18 小柱， 順序用 5ml 甲醇， 5ml 三氯甲烷， 5ml 甲醇和 5ml 水活化 C18 柱。 將處理好的樣品轉(zhuǎn)移到柱上， 用5ml 水淋洗， 然后用 6ml 乙腈洗脫， 收集在離心管中， 用氮?dú)獯蹈桑?待衍生化。

2.4 衍生化

向干的殘留物中加入 100ul 衍生化試劑， 蓋塞并渦旋混合 10s。 在 65℃的水浴中反應(yīng) 60min， 然后用氮?dú)獯党�多余的試劑�?加入 0.25ml 正己烷， 渦旋混合 10s， 供色譜分析使用。 標(biāo)準(zhǔn)溶液， 吹干后， 采用同樣的衍生化方法處理。

3. 測定

3.1 色譜條件

分析結(jié)果與譜圖

1. 氣相色譜對氯霉素分析結(jié)果

采用 ECD 檢測器對氯霉素衍生化樣品進(jìn)行分析， 得到的譜圖如圖 1 所示：

2. 工作曲線、 回收率和精密度

配置濃度分別為 200,100,50,20,10,5ug/L 的標(biāo)準(zhǔn)樣品， 衍生化后， 用 ECD 模式下檢測， 得到的線性、 檢出限結(jié)果如表 2所示

稱取飼料樣品， 分別添加 2 個(gè)水平濃度的標(biāo)準(zhǔn)品， 每個(gè)濃度水平平行測定 5 次。 結(jié)果表明， 平均回收率為 80-85%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD, n=5） 為 1.4-5%。 回收率和精密度數(shù)據(jù)結(jié)果見表 3。

3. 實(shí)際樣品

稱取 5.0g 購得的豬飼料中， 平行檢測兩次， 未檢出氯霉素殘留

結(jié)論

Thermo Scientific 的氣相色譜 Trace 1310 分析飼料中的氯霉素檢測限可以達(dá)到 2ug/kg, 定量限達(dá)到 5ug/kg, 優(yōu)于 GB/T8381.9-2005 中對于飼料中氯霉素 5ug/kg 的檢測限要求。 在分析氯霉素質(zhì)量濃度為 5-200ug/kg 時(shí)， 線性良好， 重現(xiàn)性。

參考文獻(xiàn)

[1] 蔣定國， 楊大進(jìn)， 動(dòng)物性食品中氯霉素殘留檢測技術(shù)的研究概況 [J]. 中國食品衛(wèi)生雜志： 2002,14（2）： 44-47；
[2] 徐繼林， 嚴(yán)小軍， 徐年軍， 馮凱， 對蝦中殘留氯霉素的化學(xué)源 GC/MS 分析 [J].中國水產(chǎn)科學(xué)： 2004,11（2）： 111；
[3] GB/T 8381.9-2005 飼料中氯霉素的測定 氣相色譜法： 2-3