細(xì)胞增殖檢測技術(shù)已廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、腫瘤生物學(xué)、免疫學(xué)、藥理和藥代動(dòng)力學(xué)等研究領(lǐng)域。細(xì)胞增殖是指細(xì)胞在周期調(diào)控因子的作用下,通過DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成等復(fù)雜反應(yīng)而進(jìn)行的分裂系列過程。細(xì)胞通過分裂的方式增殖,細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征 。單細(xì)胞生物以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新個(gè)體,多細(xì)胞生物以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的細(xì)胞,從而補(bǔ)充體內(nèi)衰老和死亡的細(xì)胞。細(xì)胞增殖的同時(shí),在細(xì)胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細(xì)胞,活細(xì)胞在總細(xì)胞中所占的百分比叫做細(xì)胞活力。
檢測細(xì)胞存活與增殖的方法主要包括觀察DNA合成含量和檢測細(xì)胞代謝活性兩種,前者主要是DNA前體物質(zhì)(胸腺嘧啶核苷類似物)摻入法,比如BRDU、EDU法;后者主要為MTT、XTT、MTS、CCK-8、WST-1及WST-8法等,在后者中現(xiàn)在最主流的就是CTG(CELL TITER-GLO)發(fā)光法,此法可快速靈敏的檢測活細(xì)胞數(shù)量,市場上常用的是Promega公司CellTiter-Glo化學(xué)發(fā)光細(xì)胞活性檢測試劑盒。
ATP腺嘌呤核苷三磷酸(簡稱三磷酸腺苷)參與生物體內(nèi)多種酶促反應(yīng),是活細(xì)胞新陳代謝的一個(gè)指標(biāo),其含量直接反應(yīng)了細(xì)胞的數(shù)量及細(xì)胞狀態(tài):實(shí)驗(yàn)過程中向細(xì)胞培養(yǎng)基加入等體積CellTiter-Glo™試劑,測量發(fā)光值,在光信號和體系中,發(fā)光值與ATP量成正比,而ATP又和活細(xì)胞數(shù)正相關(guān),因此可通過檢測ATP含量得細(xì)胞活力。同普通的MTT、CCK8法相比,CellTiter-Glo™發(fā)光活細(xì)胞檢測系統(tǒng)的檢測試劑具有最高靈敏度和較長的信號持續(xù)時(shí)間,此系統(tǒng)已經(jīng)廣泛地應(yīng)用在生命科學(xué)研究領(lǐng)域中,如一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測定等,各實(shí)驗(yàn)室已普遍使用此技術(shù)。此法還有很多優(yōu)點(diǎn),如細(xì)胞活性分析是高效的“加樣-混合-測量”系統(tǒng),實(shí)驗(yàn)操作方便快捷,同時(shí)節(jié)約細(xì)胞用量。CellTiter-Glo™試劑和細(xì)胞培養(yǎng)中的常用培養(yǎng)基兼容,如RPMI1640、MEM、DMEMand Ham's F12,也不受酚紅和有機(jī)溶劑的影響,誤差小,準(zhǔn)確率高。同MTT、CCK8法具體對比可見下表: