銳博生物--Nature子刊：IGF-1如何幫助患者免受腎病之苦？

腎臟管狀上皮細(xì)胞受損能誘發(fā)急性腎衰竭與梗阻性腎病。服用類胰島素生長(zhǎng)因子（insulin-like growth factor-1, IGF-1）能改善小鼠單側(cè)輸尿管結(jié)扎（UOO）引起的腎臟損傷，但其潛在機(jī)理不完全了解。今年6月，上海交大醫(yī)學(xué)院的研究團(tuán)隊(duì)在Nature子刊Scientific Reports上發(fā)表文章，他們發(fā)現(xiàn)當(dāng)腎受損時(shí)IGF-1可能通過(guò)ERK/MAPK信號(hào)通路來(lái)保護(hù)腎管狀上皮細(xì)胞。

首先，我們來(lái)看看研究團(tuán)隊(duì)是怎么設(shè)置實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的：第一組小鼠進(jìn)行UUO手術(shù)，其中一半每天腹腔注射IGF-1，剩下的注射生理鹽水進(jìn)行對(duì)照；第二組小鼠進(jìn)行假手術(shù)，并進(jìn)行與第一組相同的處理，即UUO/IGF-1組、UUO組、假手術(shù)/IGF-1組、假手術(shù)組。

這個(gè)實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)思路與方法比較清晰簡(jiǎn)單，讓我們一起一探究竟吧。

知道了大致的實(shí)驗(yàn)思路與方法，我們?cè)賮?lái)在看看他們得出的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

IGF-1：我跟UUO為敵

UUO是一個(gè)成熟的腎臟損傷模式，能造成持續(xù)性腎纖維化。IGF-1已被證明能改善腎損傷以及由其引發(fā)的腎纖維化。研究者對(duì)這個(gè)結(jié)論進(jìn)行了驗(yàn)證并探究了是否IGF-1會(huì)影響UUO誘導(dǎo)的腎上皮細(xì)胞凋亡。通過(guò)熒光凋亡實(shí)驗(yàn)進(jìn)行分析后得出UUO誘發(fā)腎上皮細(xì)胞凋亡，而IGF-1降低UUO誘導(dǎo)的腎上皮細(xì)胞凋亡的發(fā)生。

IGF-1：抗凋亡蛋白Bcl-2，我來(lái)助你一臂之力

接著檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組小鼠中凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)情況，UUO/IGF-1組中Bcl-2在蛋白質(zhì)水平而非mRNA水平顯著增加。這表明IGF-1可能可以通過(guò)修飾Bcl-2蛋白翻譯來(lái)增加抗凋亡蛋白Bcl-2，從而減少UUO組中腎上皮細(xì)胞凋亡。

IGF-1與miR-429的宿敵之爭(zhēng)

基于上述結(jié)論，研究者假設(shè)IGF-1能通過(guò)miRNAs影響腎上皮細(xì)胞中的Bcl-2。通過(guò)生物學(xué)信息分析與檢測(cè)。他們發(fā)現(xiàn)，miR-429在Bcl-2的3’端UTR有一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，而在UUO/IGF-1組小鼠腎上皮細(xì)胞中miR-429的水平顯著降低。

接著，研究者將miR-429 mimic或antisense轉(zhuǎn)染到腎上皮細(xì)胞中，通過(guò)RT-qPCR與熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)證明miR-429結(jié)合到Bcl-2 mRNA的3’端UTR會(huì)抑制Bcl-2蛋白翻譯。數(shù)據(jù)表明miR-429確實(shí)抑制腎上皮細(xì)胞中的Bcl-2蛋白翻譯。

IGF-1：miR-429，看我用ERK1/2信號(hào)通路制服你

為了了解UUO小鼠中IGF-1如何抑制miR-429，他們?cè)隗w外UUO/IGF-1組細(xì)胞中用了IGF-1下游信號(hào)抑制劑，測(cè)試他們對(duì)Bcl-2的影響。結(jié)果表明，用PD98059（ERK/MAPK-p42/44抑制劑）抑制ERK1/2信號(hào)途徑不僅會(huì)導(dǎo)致IGF-1對(duì)miR-429影響的減弱，而且降低了Bcl-2的激活水平。數(shù)據(jù)表明，IGF-1能抑制依賴于ERK/MAPK信號(hào)途徑的miR-429來(lái)保護(hù)腎上皮細(xì)胞免受腎損傷，miR-429抑制依賴于Bcl-2的抗細(xì)胞凋亡。

預(yù)防腎臟上皮細(xì)胞凋亡是腎損傷后保護(hù)腎功能的關(guān)鍵。作為一個(gè)眾所周知的抗凋亡基因，Bcl-2穩(wěn)固線粒體，阻礙經(jīng)典凋亡途徑，并通過(guò)結(jié)合Beclin1來(lái)抑制自嗜。在這個(gè)研究中，研究者發(fā)現(xiàn)Bcl-2在UUO條件下受IGF-1控制，作為腎上皮細(xì)胞抵抗損傷與存活的主要機(jī)制，并證明了Bcl-2是在轉(zhuǎn)錄后水平上受IGF-1調(diào)節(jié)的。在胃癌細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞中，miR-429表現(xiàn)出能抑制Bcl-2蛋白翻譯。這篇文章首次報(bào)道了IGF-1調(diào)節(jié)miRNA-429，且是用ERK/MAPK-p42/p44信號(hào)通路依賴型的方式調(diào)節(jié)的。

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