應用TSQ 8000 Evo三重四極桿串接氣質快速篩查煙草中122種農(nóng)藥殘留
關鍵詞
TSQ 8000 Evo；煙草基質；農(nóng)藥殘留；快速篩查；方法包
1. 前言
2014 年 1 月 15 日中國煙草總公司頒布了煙草及煙草制品中 多種農(nóng)藥殘留量的測定的行業(yè)標準 YQ/T 47.1—2014，其中第 一部分為串接氣質檢測農(nóng)藥殘留的方法。該標準于 2014 年 2 月 10 正式實施。賽默飛世爾科技針對這一行業(yè)標準，開發(fā)了
煙草中檢測多農(nóng)殘的方法。
本實驗用 TSQ 8000 Evo 結合賽默飛世爾科技農(nóng)殘分析色譜柱 （TR-pesticide II 30 m*0.25 mm*0.25 µm）分析煙草中的122種農(nóng)藥殘留，得到了非常出色的結果。各種農(nóng)藥的最低檢測 限在 0.004ppb-0.75ppb 之間，在 5 ppb–200 ppb 的范圍有 良好的線性，且用 10 ppb 樣品連續(xù) 5 針進樣，得到 RSD 在 1.01%–9.69% 之間，表明此方法具有良好的重現(xiàn)性。
2. 實驗部分
2.1 儀器和色譜柱
TSQ 8000 Evo 三重四極桿氣相色譜質譜聯(lián)用儀（Thermo ScientificTM 美國），TR-pesticide II 農(nóng)殘分析柱（30 m*0.25 mm*0.25 µm 帶 5m 預柱）
2.2 儀器方法
GC 方法：
傳輸線溫度：300ºC。
PTV 進樣口：起始溫度為70ºC，進樣時間 0.05 min；然后 以 4.5ºC/min 升至 280ºC，保持 1 min，將所有化合物通過 程序升溫的進樣方式轉移至色譜柱；隨后以 14.5ºC/min 升至 320ºC，保持 5 min，設置進樣口的清潔模式。不分流進樣，不分流時間1.5min。
載氣：恒流，1.2 mL/min；
柱溫箱：40ºC 起始保持 1.5 min，以 25ºC/min 升至 90°， 保持 1.5 min；再以 25ºC/min 的速率升至 180ºC；隨后以5ºC/min 的速率升至 280ºC；最后以 10ºC/min 的速率升至 300ºC，保持 5 min。整個升溫程序 35 min。
進樣量：2 µl
質譜方法：
離子源溫度：300 ºC，燈絲電流為 25 µA，采用 T-SRM 方法， 無需分時間段。部分方法如圖 1 所示（總共 402 對 SRM 離子對）：
2.3 前處理方法
提取
稱取 2 g 樣品于 50 mL 具蓋離心管中，精確至 0.01 g，加 入 10 mL 水（4.1），手持離心管振蕩直至樣品與水充分混合 后，靜置 10 min。分別移取 10 mL 乙腈（4.2）和 0.1 mL 混 合內標工作溶液（4.11.4）于該離心管中，并置于漩渦混合 振蕩儀（5.2）上以 2000 r/min 速率振蕩 2 min。將離心管在 （-18℃ ~-20℃）條件下冷凍保存 10 min 后，取出。向離心 管中分別加入 5 mL 甲苯（4.3）、4 g 無水硫酸鎂（4.4）、1 g 氯化鈉（4.5）、1 g 檸檬酸鈉（4.6）、0.5 g 檸檬酸氫二鈉（4.7），立即手持離心管劇烈振蕩以防結塊，再置于漩渦混合振蕩儀 （5.2）上以 2000 r/min 速度振蕩 2 min，然后以 4000 r/min 離心 5 min。收集上層清液備用。
凈化
移取 1.5 mL 樣品提取液上層清液（7.1）于 2 mL 離心管中， 加入 150 mg 無水硫酸鎂（4.4）和 50 mg N- 丙基乙二胺鍵合 固相吸附劑（4.8），于漩渦混合振蕩儀（5.2）上以 2000 r/ min 速率振蕩 2 min，以 4000 r/min 離心 5 min，收集上層清液，待檢測分析。
3. 實驗結果
3.1 Auto SRM 優(yōu)化部分化合物的離子對信息
AutoSRM 顧名思義就是可以自動優(yōu)化化合物SRM 離子對的軟件，該軟件通過選擇母離子，選擇子離子，自動優(yōu)化碰撞能量這三個步驟可以完成方法優(yōu)化，極大得簡化了常規(guī)串接氣質
建立化合物檢測方法的步驟，節(jié)省了時間。賽默飛世爾科技全 新一代三重四極桿氣相色譜質譜聯(lián)用儀 TSQ 8000 Evo 獨有的 AutoSRM 功能，可以自動優(yōu)化離子對信息及碰撞能量，并且當一次優(yōu)化的化合物數(shù)目較多時，可以智能得調整進樣的次數(shù)以期在最少的時間內得到最優(yōu)化的方法，使得整個方法建立部分 更加簡單方便。整個 AutoSRM 的步驟如圖 1 所示：1）選擇母離子
2）選擇子離子
3）優(yōu)化碰撞能量
3.2 標準曲線
分別配置 5 ppb、10 ppb、20 ppb、50 ppb、100 ppb、200 ppb 的混標溶液，采用內標法定量，內標為莠去津或者三苯基磷酸酯（按 照保留時間來確定以哪種物質為內標，本實驗保留時間在 20 min 之前的化合物都以莠去津為內標，20 min 之后以三苯基磷酸酯為 內標）。下表列出所有 122 種化合物的標準曲線方程以及線性相關系數(shù)，可以看出，應用 TSQ 8000 Evo 快速掃描檢測這 122 種化合物，可以得到良好的線性方式，有利于定量的準確性。
表 1： 122 種化合物的線性方程及相關系數(shù)（* 表示 IS）
3.3 重現(xiàn)性及最低檢出限
用10ppb的樣品重復進樣5針，檢測方法的重現(xiàn)性。所得的重現(xiàn)性結果如下圖所示，所有的化合物的重現(xiàn)性在1.01%-9.69%之間（如 表 2 所示）。分別配置100ppt、200ppt、500ppt、1ppb以及2ppb的樣品，按照S/N為3和S/N為10來估算化合物的最低檢出限及最低定量限。 各個化合物的 LOD 和 LOQ 如表 2 所示。
表 2：122 種化合物的最低檢出限及重現(xiàn)性（* 表示 IS）
選取部分化合物在 100ppt 時的色譜圖：
圖 4： 部分化合物 100 ppt 的色譜圖
3.4 煙草中農(nóng)殘檢測的方法包
想要快速建立方法時，直接拷貝方法包中的文件夾到 C:\ TraceFinderData\32\Methods 中，方法就可以在 TraceFinder 軟件中打開，這個方法包括數(shù)據(jù)處理方法和進樣方法。
圖 5：打開方法包
4. 結論：
應用 Thermo ScientificTM 三重四極桿串接氣質聯(lián)用儀 TSQ 8000 Evo，可以快速分析煙草中的農(nóng)藥殘留。方法學驗證表明，該 方法的線性、檢出限、RSD 值均滿足 YQ/T 47.1—2014 煙草及 煙草制品多種農(nóng)藥殘留量的測定以及 YQ 50—2014 煙葉農(nóng)藥最 大殘留限量的要求。應用 Thermo Fisher 方法包，可以快速建立進樣方法和數(shù)據(jù)處理方法，拿來即用，無需從數(shù)據(jù)庫中整合信息建立方法，而是直接用現(xiàn)成的方法，節(jié)省大量時間，提高分析效率。一級和二級高分辨質譜數(shù)據(jù)，保證了定性和定量結果的可靠性；媲美高端三重四極桿的靈敏度和寬線性范圍可輕 松定量藥物中的痕量雜質。與三重四極桿質譜相比，Q Exactive Focus 采用一級質譜定量不需要優(yōu)化母離子，子離子參數(shù)，僅利
用目標化合物精密分子質量即可實現(xiàn)準確定量，更為方便快速。采用二級高分辨質譜定量可以記錄子離子全掃描信息，通過在數(shù)據(jù)后處理中靈活的挑選更具有專屬性的子離子進行定量，有效的排除基質干擾，選擇性更好，靈敏度更高。
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