干貨分享：小鼠內(nèi)臟組織樣品研磨提取核酸、微生物

 

近期的組織研磨和樣品處理分享、討論，我們邀請(qǐng)到了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測(cè)所袁老師給大家分享，內(nèi)容是——小鼠內(nèi)臟組織樣品研磨提取核酸、微生物，研磨使用的儀器是鼎昊源TL2020組織研磨儀。

 

那接下來(lái)，就讓我們先睹為快，看看這個(gè)案例的情況。

 

1、取適量組織裝入離心管，組織盡量剪碎成小塊；

2、在離心管中加入氧化鋯珠數(shù)顆（一次性使用）；

3、先加入Trizol（不建議加入太多 Trizol，液體體積過(guò)大影響勻漿效果），蓋好管蓋，裝入鼎昊源TL2020組織研磨儀適配器中，安裝上機(jī)。

4、組織研磨儀研磨參數(shù)設(shè)置為一定轉(zhuǎn)速，研磨時(shí)間為2~5min（不同組織研磨時(shí)間不同，腦1min，肝臟、脾臟和腎臟2min、肺臟比較難研磨需3~5min，可能更長(zhǎng)，中間應(yīng)停頓1~2次防止溫度過(guò)高，研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱預(yù)冷）；

5、再加入適量Trizol至總體積；

6、后面步驟按Trizol說(shuō)明進(jìn)行。

 

1、取適量組織裝入離心管，組織盡量剪碎成小塊，樣品量較多時(shí)使用大離心管；

2、在離心管中加入氧化鋯珠數(shù)顆，使用大離心管時(shí)，可以將氧化鋯珠數(shù)量增加；

3、加入適量的滅菌PBS或生理鹽水，總體積為離心管單管體積的1/3~1/2為好，蓋好管蓋，裝入鼎昊源TL2020組織研磨儀適配器中，安裝上機(jī)（研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱預(yù)冷）。

4、TL2020組織研磨儀研磨參數(shù)設(shè)置為一定轉(zhuǎn)速，研磨時(shí)間為1~5min（不同組織研磨時(shí)間不同，腦1min，肝臟、脾臟和腎臟2min、肺臟比較難研磨需3~5min，可能更長(zhǎng)，中間應(yīng)停頓1~2次防止溫度過(guò)高），若研磨不充分，可以繼續(xù)研磨到充分為止；

5、一定溫度、轉(zhuǎn)速，離心數(shù)分鐘；

6、取上清液按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行后續(xù)提取步驟。

實(shí)驗(yàn)1中，我們之前試過(guò)一齊加1ml的Trizol，可能是體積過(guò)大，反而勻漿效果不好，所以就改成先加一部分裂解先勻漿，然后再補(bǔ)齊1ml體積。

 

嘉賓：實(shí)驗(yàn)1中，我們之前試過(guò)一齊加1ml的Trizol，可能是體積過(guò)大，反而勻漿效果不好，所以就改成先加一部分裂解先勻漿，然后再補(bǔ)齊1ml體積。

 

昊諾斯嘉賓：如果前面勻漿充分了，后面補(bǔ)齊裂解后不需要再研磨的，只需稍微混勻就可以。

 

用戶：可以選擇干磨嗎？就組織直接扔進(jìn)去弄成勻漿或者粉末，我再根據(jù)需要加trizol或者蛋白裂解液

 

嘉賓：跟大家分享下，我們最近用組織研磨儀用于抗原加佐劑的乳化，效果還不錯(cuò)。一機(jī)兩用。

 

嘉賓：組織干磨效果不好，需要加入適量的液體，沒(méi)有液體很多組織掛在壁上。

 

用戶：提取下的核酸用途是什么？這個(gè)是我最關(guān)心的。

 

嘉賓：我們用于病原微生物檢測(cè)。

 

用戶：怎么個(gè)檢測(cè)法您能給我簡(jiǎn)單介紹一下嗎？

 

嘉賓：所以我們用的最多的是實(shí)驗(yàn)2，先勻漿，破碎組織，釋放組織細(xì)胞中的病毒。

 

嘉賓：主要采用PCR為基礎(chǔ)的分子生物學(xué)檢測(cè)。

 

用戶：嗯，PCR，我知道了，謝謝。

 

嘉賓：不客氣。一般的組織核酸抽提試劑盒中，都會(huì)有一部勻漿的步驟。

 

嘉賓：以前沒(méi)有研磨儀的時(shí)候都是用研缽手工勻漿，一天幾十上百個(gè)樣品，累成狗。

 

用戶：研磨如果用液氮處理，里面的液體不會(huì)凍住嗎？

 

用戶：我也有這個(gè)疑問(wèn)，看來(lái)這個(gè)儀器是核酸分析必須的。

 

嘉賓：開始會(huì)凍住，等研磨到一定時(shí)間就自然解凍了，我們處理時(shí)只是讓它預(yù)冷一下，最好不要凍住。所以一般是放在-80度冰箱稍預(yù)冷一下就可以了

 

用戶：嗯！

 

用戶：謝謝

 

嘉賓：是的，核酸檢測(cè)必備。

 

用戶：早些天我看一個(gè)打沙棘的視頻，凍掉以后，直接就打下來(lái)了，所以冷凍還是有效果的，原理是一樣的。

 

嘉賓：還要講一下，選質(zhì)量好的EP管，現(xiàn)在一些國(guó)產(chǎn)的EP管質(zhì)量太差，蓋不嚴(yán)，導(dǎo)致液體漏出。如果預(yù)冷的話，一些EP管就可能被打碎了，我們有過(guò)這樣的例子。

 

用戶：我們也因?yàn)橘|(zhì)量不好的EP管影響過(guò)實(shí)驗(yàn)，所以試劑耗材也很重要。

 

嘉賓：同意。

 

用戶：一定要選擇質(zhì)量有保證的產(chǎn)品。

 

嘉賓：是啊。關(guān)于振動(dòng)頻率說(shuō)明一下，我們選的頻率比較高，我看到有的資料上講一般動(dòng)物樣品如大腦、心臟、肺、胃、肝臟等無(wú)骨骼組織的研磨推薦頻率是1000-1100r/min研磨時(shí)間是1-2min，具體的頻率可根據(jù)樣品材料及數(shù)量的不同，做適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。過(guò)大的頻率或者時(shí)間都可能會(huì)導(dǎo)致部分DNA的斷裂，建議每次研磨時(shí)間在1mm左右，中間停頓一會(huì)，重復(fù)2-3次。

 

用戶：謝謝袁老師。