組分 | 描述 |
JC-1(染料) | 4瓶,每瓶用于25個樣本。凍干粉,使用前稀釋至儲存液(Stock Solution),使用時稀釋至工作液(Working Solution) |
10 x Assay Buffer | 60ml,足以用于100個樣本。使用前稀釋至1X |
試劑準(zhǔn)備:
A.10× Assay Buffer的稀釋(Assay Buffer作為實驗的反應(yīng)液用于清洗細胞) :
1.制備1x106 /ml的細胞懸液, 濃度不宜過高,因為超過該濃度容易造成細胞的凋亡。
2.誘導(dǎo)細胞進行凋亡的處理,同時保留一份未經(jīng)誘導(dǎo)的細胞作為對照。
3.凋亡處理結(jié)束后,每個無菌的15ml聚苯乙烯離心管中加入1ml細胞懸液,室溫下,400×g ,離心5分 鐘,棄上清。
4.每管加入0.5 ml 新鮮配制的JC-1工作液,充分混勻后置于37°C的CO2培養(yǎng)箱,孵育10-15分鐘。
5.按以下步驟洗滌細胞兩次:
第一次:每管加體積為2 ml的 1× Assay Buffer,輕輕懸浮細胞,振蕩或用槍頭使細胞分散,以免細 胞聚集成塊。400×g ,室溫離心5分鐘,棄上清。
第二次:每管加體積為1ml的 1× Assay Buffer,輕輕懸浮細胞,振蕩或用槍頭使細胞分散,以免細 胞聚集成塊。400×g ,室溫離心5分鐘,棄上清。
6.每管加體積為0.5 ml的 1× Assay Buffer,輕輕懸浮細胞,上機檢測。
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