簡(jiǎn)介

Ostro樣品制備板可對(duì)生物樣品中的堿性藥物和相關(guān)化合物進(jìn)行簡(jiǎn)單、快速的LC-MS測(cè)定。Ostro樣品板為液液萃取、蛋白質(zhì)沉淀、過濾以及后續(xù)從最終萃取物中清除磷脂提供了方便。本文運(yùn)用Ostro樣品板對(duì)牛奶中的獸藥多殘留進(jìn)行了篩查。使用此樣品板只需簡(jiǎn)單的幾個(gè)步驟即可有效沉淀蛋白質(zhì)并除去潛在的干擾物質(zhì)，從而完成牛奶樣品的制備。萃取的樣品通過樣品板時(shí)，蛋白質(zhì)通過過濾被去除，而磷脂干擾物則通過被保留在專利的吸附劑上被去除。完成簡(jiǎn)單的樣品制備步驟之后，使用UPLC-MS/MS對(duì)復(fù)溶樣品進(jìn)行分析。為了證明本方法的適用性，我們從主要的獸藥種類中選擇了具有代表性的化合物，包括四環(huán)素、氟喹諾酮、磺胺類、大環(huán)內(nèi)酯、β-內(nèi)酰胺和β-腎上腺素能藥物。

樣品制備

將125 μL牛奶轉(zhuǎn)移至樣品板孔中（樣品體積不得大于125 μL）。加入375 μL 0.2%甲酸的乙腈（ACN）溶液。抽吸幾次以使其充分混合。洗脫至收集板中。加入100 μ L 200 mM甲酸銨的甲醇/ACN（50:50）溶液，充分混合。蒸干并復(fù)溶于100 μL ACN/25 mM甲酸銨水溶液（25:75）中。圖1展示了使用Ostro樣品板時(shí)的SPE典型設(shè)置。

結(jié)果與討論

多殘留分析

Ostro樣品板的結(jié)果與之前發(fā)表的方法¹相當(dāng)。然而，Ostro樣品板操作耗時(shí)更少，并且更適用于高通量分析。使用此方法，一般分析人員可在幾分鐘內(nèi)制備10個(gè)甚至更多的樣品，而采用之前的方法則需幾個(gè)小時(shí)。圖2顯示了恩諾沙星（10 μg/ L）基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)品的典型LC-MS色譜圖。盡管對(duì)于大部分其它化合物來說，使用該方法分析時(shí)表現(xiàn)出相似的分析性能，但仍然無法對(duì)10 μg/ L濃度的金霉素、土霉素和林可霉素進(jìn)行定量分析。最近研發(fā)了一種四環(huán)素的替代方法²。表2示出了觀察到的多殘留牛奶分析的回收率數(shù)據(jù)。

磷脂去除

牛奶中含有大量的磷脂，約占其總脂肪含量的1% ³。在LC分離中，這些磷脂會(huì)直接干擾后洗脫的化合物。此外，結(jié)果表明磷脂殘留的累積會(huì)使反相LC分離的性能變差⁴。圖3展示了采用為鑒定磷脂而選擇的MRM通道（m/z184>184）對(duì)牛奶樣品進(jìn)行分析的UPLC-MS/MS色譜圖。下圖展示了使用Ostro樣品板處理牛奶樣品獲得的結(jié)果。上圖為采用蛋白質(zhì)沉淀（未經(jīng)SPE純化）獲得的結(jié)果。Ostro樣品板可有效去除超過98%的磷脂。

4. Eliminating Phospholipids in Drug Discovery Extractions Using a Fast, Generic Sample Clean-up Method, Waters Application Note 720004046en