利用CORTECS 2.7 µm色譜柱進(jìn)行奧美拉唑的強(qiáng)制降解分析
Kenneth D. Berthelette, Thomas Swann 和 Kenneth J. Fountain
沃特世公司(美國(guó)馬薩諸塞州米爾福德)

簡(jiǎn)介：

對(duì)于藥物化合物生產(chǎn)而言，化學(xué)穩(wěn)定性試驗(yàn)至關(guān)重要。口服制劑尤為如此。胃腸道消化會(huì)改變活性藥物成分(API)，產(chǎn)生具有潛在危害性的副產(chǎn)物。因此在開發(fā)過程中，能否對(duì)這些副產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)和定性無疑非常重要。要對(duì)一種化合物進(jìn)行定性，必須將所有降解產(chǎn)物與主要化合物分離開來。CORTECS 2.7 µm色譜柱為復(fù)雜樣品的分析提供了優(yōu)異的峰形與分離度。這款色譜柱填充了2.7 µm的實(shí)心顆粒填料，能獲得比全多孔色譜柱更高的分離度以及更低的背壓。一般來說，由于150 mm亞3 µm色譜柱會(huì)在HPLC系統(tǒng)上產(chǎn)生高反壓，致使其使用受到限制。而CORTECS 2.7 µm色譜柱的低反壓特性使得150 mm色譜柱成功用于HPLC系統(tǒng)，不僅能在系統(tǒng)的壓力限值內(nèi)運(yùn)行(<5000 psi)，還能實(shí)現(xiàn)極高的分離度。本應(yīng)用紀(jì)要將以?shī)W美拉唑的強(qiáng)制降解為例，在配有紫外檢測(cè)器和質(zhì)譜檢測(cè)器的Alliance HPLC系統(tǒng)上使用CORTECSC₁₈⁺，2.7 µm, 150 mm色譜柱進(jìn)行分析。

奧美拉唑是一種堿性化合物，通常作為質(zhì)子泵抑制劑，用于胃酸反流和胃灼熱的治療。這種API在低pH環(huán)境下不穩(wěn)定，因此，需要對(duì)其成品在酸性條件下強(qiáng)制降解，并定性鑒別在該條件下形成的副產(chǎn)物。對(duì)于強(qiáng)制降解樣品之類的復(fù)雜混合物，CORTECS 2.7 µm色譜柱可實(shí)現(xiàn)出色的高分離度。利用沃特世ACQUITY QDa質(zhì)譜檢測(cè)器能夠通過質(zhì)譜對(duì)色譜峰進(jìn)行快速鑒定。ACQUITY QDa質(zhì)譜檢測(cè)器使用簡(jiǎn)單，僅需簡(jiǎn)單培訓(xùn)，操作人員即可開展高效率的工作，獲得快速可靠的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。與傳統(tǒng)的質(zhì)譜儀不同，ACQUITY QDa檢測(cè)器不需要定期調(diào)試或校準(zhǔn)。這就為經(jīng)驗(yàn)不足的分析人員提供了極大的易用性。通過使用最新的顆粒技術(shù)與檢測(cè)技術(shù)，分析人員能夠快速可靠地分離復(fù)雜混合物并輕松獲取色譜峰的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。這將有利于在方法開發(fā)中更快作出決策，從而有效縮短總的開發(fā)周期。

樣品制備：

用研缽將兩片奧美拉唑(20 mg)分別進(jìn)行研磨，然后轉(zhuǎn)移至兩個(gè)100 mL容量瓶中。向其中一個(gè)容量瓶(A)中加入25 mL 0.1 N的鹽酸溶液，在室溫下靜置1.5小時(shí)。然后向溶液中加入25 mL 0.1 N的NaOH溶液進(jìn)行中和。向容量瓶中加入甲醇，定容至100 mL。另一組溶液(B)用50:50的甲醇/水溶液稀釋并定容至100 mL。使用0.2 μm的過濾器對(duì)兩種溶液進(jìn)行過濾。取0.66 mL的A溶液與0.34 mL的B溶液，在LCMS認(rèn)證最大回收樣品瓶(部件號(hào)600000749CV)中進(jìn)行混合，從而完成進(jìn)樣樣品的制備。

結(jié)果與討論：

將樣品注入配有2998 PDA檢測(cè)器和ACQUITY QDa質(zhì)譜檢測(cè)器的Alliancee2695 HPLC系統(tǒng)中。在文獻(xiàn)記錄和美國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)品參考文獻(xiàn)中查到，奧美拉唑至少有八種已知降解化合物2,3,4。表1列出了這些化合物及對(duì)應(yīng)的質(zhì)量數(shù)。此分離中存在兩組同分異構(gòu)體。相關(guān)化合物F和G的質(zhì)量數(shù)相同(m/z 312.36)，奧美拉唑N-氧化物與奧美拉唑砜的質(zhì)量數(shù)相同(362.42)。圖1給出了酸性降解樣品在CORTECSC₁₈⁺, 2.7 μm, 4.6 x150 mm色譜柱上的分離結(jié)果。

如上面的色譜圖所示，所有洗脫峰都分離完全且峰形極好。由于CORTECS 2.7 μm色譜柱的反壓低于相同填料尺寸的全多孔色譜柱，因此可以使用150 mm長(zhǎng)的色譜柱以獲得最高分離度，這對(duì)于此次分離中的兩組異構(gòu)體來說非常重要。而且，使用ACQUITY QDa質(zhì)譜檢測(cè)器可為表1中的各成分匹配UV峰，即便單位質(zhì)量數(shù)分辨率無法分辨出同分異構(gòu)體5/6和7/8，也可以通過進(jìn)樣這些化合物的純凈標(biāo)準(zhǔn)品來確認(rèn)它們的洗脫順序。

提取離子色譜圖(EIC)用于確認(rèn)峰識(shí)別。圖2顯示了以?shī)W美拉唑和2-巰基-5-甲氧基苯并咪唑?yàn)槔�的EIC。ACQUITY QDa檢測(cè)器還能夠針對(duì)指定峰生成相應(yīng)的質(zhì)譜圖。圖3顯示了奧美拉唑與烏非拉唑的紫外質(zhì)譜圖。紫外質(zhì)譜圖譜分析通常用于確認(rèn)色譜峰識(shí)別以及檢測(cè)其它化合物的共洗脫。

基于CORTECS 2.7 μm, 150 mm色譜柱帶來的出色分離，加上ACQUITY QDa質(zhì)譜檢測(cè)器得到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，可以實(shí)現(xiàn)降解物的鑒定。通過使用CORTECS 2.7 μm色譜柱實(shí)現(xiàn)了強(qiáng)制降解樣品中八種不同化合物的分離。此類色譜柱的高柱效和低反壓使得HPLC系統(tǒng)能夠獲得最大分離成為可能。

結(jié)論：

本實(shí)驗(yàn)采用配有PDA和QDa質(zhì)譜檢測(cè)器的Alliance HPLC系統(tǒng)，利用CORTECSC₁₈⁺, 2.7 μm, 4.6 x 150 mm色譜柱對(duì)奧美拉唑進(jìn)行了強(qiáng)制降解研究。如上文所示，此色譜柱展現(xiàn)出對(duì)兩組關(guān)鍵的同分異構(gòu)體降解物的高分離度，以及其反壓與傳統(tǒng)HPLC完全兼容(<5000 psi)。使用 CORTECSC₁₈⁺ 色譜柱分析奧美拉唑(一種弱堿性化合物)及其降解物能獲得清晰且對(duì)稱的峰形，即使是使用低pH，低離子強(qiáng)度pH改性劑(比如甲酸)，也絲毫無損分離度。CORTECS 2.7 μm色譜柱加上PDA和QDa質(zhì)譜檢測(cè)器，實(shí)現(xiàn)了復(fù)雜樣品混合物中相近洗脫化合物的快速分離和鑒定。在HPLC系統(tǒng)上，可在不超出壓力限值的適當(dāng)流速下使用150 mm長(zhǎng)的CORTECS2.7 μm色譜柱，從而使得HPLC 分離潛能最大化。

參考文獻(xiàn)：

1. Bozdag, S.; Calis, S.; Sumnu, M. Formulation and stability evaluation ofenteric-coated Omeprazole formulations. S.T.P. Pharma Sciences 1999,9, 321–327.

2. Seshadri, R.K.; Raghavaraju, T.V., Chakravarthy, I.E. A Single GradientStability-Indicating Reversed-Phase LC Method for the Estimation ofImpurities in Omeprazole and Domperidone Capsules. ScientiaPharmaceutica 2012, 437–458.

3. Rajab, A; Touma, M.; Rudler, H.; Afonso, C.; Seuleman, M. Slow,spontaneous degradation of lansoprazole, omeprazole and pantoprazoletablets: isolation and structural characterization of the toxic antioxidants3H-benzimidazole-2-thiones. Pharmazie 2013, 749–754.

4. Search Results USP Reference Standards.