【產(chǎn)品簡介】禽流感H5，H9，雞新城疫病毒ELISA檢測試劑盒用于免疫新城疫疫苗后的抗體動態(tài)水平監(jiān)測，指導(dǎo)免疫預(yù)防工作，評估雞場禽流感H5，H9，雞新城疫病毒疫苗免疫狀況，也可用于該病的流行病學(xué)調(diào)查。

【產(chǎn)品內(nèi)容】

【成分性狀】

【用法與判定】 

1、需要自備的器材

1.1微量移液器；

1.2 微量移液器配套使用的槍頭；

1.3 用來稀釋洗滌液的500ml量筒；

1.4 適用于檢測96T微孔板的酶標(biāo)儀；

1.5 用于稀釋樣品的1.5ml Ep管；

1.6 蒸餾水或去離子水。

2、樣品的制備 

用樣品稀釋液將待檢血清樣品進(jìn)行100倍稀釋（建議：2μl血清樣品加入198μl樣品稀釋液中），樣品加入包被板前要充分混勻，稀釋不同待檢樣品注意更換槍頭。注意：①制備血清用的血液樣本應(yīng)無溶血現(xiàn)象發(fā)生；②不能稀釋陰性、陽性對照。

3、操作步驟（﹡使用前應(yīng)輕輕旋轉(zhuǎn)或震蕩予以混勻，所有試劑應(yīng)恢復(fù)至室溫）

3.1  在A1和A2孔中分別加入100μl陰性對照；

3.2  在A3和A4孔中分別加入100μl陽性對照；

3.3  取100μl經(jīng)1：100稀釋好的待檢樣品加入相應(yīng)孔中，并做好記錄；

3.4  37℃孵育1h；

3.5  將各孔的液體棄入廢液桶，每孔加250μl的洗滌液（試劑盒內(nèi)20×濃縮洗滌液需用蒸餾水或去離子水稀釋后方可使用。如有結(jié)晶，需先溶解后，方可進(jìn)行稀釋）進(jìn)行洗板，重復(fù)5次，每次30s；

﹡加液時防止各孔間洗滌液串流影響檢測結(jié)果，盡量將孔內(nèi)洗滌液拋甩干凈；

3.6  每孔加100μl酶標(biāo)結(jié)合物；

3.7  37℃孵育1h；重復(fù)步驟3.5；

3.8  每孔加100μl底物液；

3.9  37℃孵育10min（避光顯色）；

3.10 每孔加100μl的終止液；

3.11 立刻于450nm波長處測定各孔的吸光度值，即OD450值。

4、試驗有效性判斷

4.1陰性對照：正常情況下，陰性對照孔OD450值≤0.2；

4.2陽性對照：正常情況下，陽性對照孔OD450值≥0.4；

4.3臨界值(C.O.)計算：臨界值=0.20+陰性對照均值；陰性對照OD450值大于0.2時應(yīng)舍棄，如所有陰性對照OD450值均大于0.2時須重復(fù)實驗；陰性對照低于0.05時以0.05計算。

4.4結(jié)果判定： 檢測樣品OD450值≥臨界值，判定該檢測樣品為陽性； 檢測樣品OD450值＜臨界值，判定該檢測樣品為陰性。

【注意事項】

（1）待檢血清樣品數(shù)量過多時，應(yīng)先使用血清稀釋板將所有待檢血清稀釋完畢后，再統(tǒng)一將血清樣品加入酶標(biāo)板中，使反應(yīng)時間一致。

（2）試劑盒使用的過程中不要吸煙、喝水和吃東西。

（3）底物液和終止液對皮膚有刺激性，注意防護(hù)。

（4）底物液不要暴露于強光和任何氧化劑；使用潔凈的玻璃和朔料容器處理底物液。

（5）所有試劑應(yīng)在2～8℃存放；使用前恢復(fù)到室溫，使用后放回2～8℃。

（6）注意防止試劑盒組分受到污染。

（7）不要使用超過有效期的試劑，不同批次試劑盒的組分不要混用。

（8）操作過程中的移液、時間和洗滌必須精確。

【規(guī)格與包裝】96T×1

【貯藏與有效期】2～8℃避光保存，有效期為6個月