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                                全血基因組DNA提取試劑盒(50次)-說明書

                                瀏覽次數(shù):2989 發(fā)布日期:2011-10-11  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負
                                全血基因組DNA提取試劑盒(50次)
                                試劑盒組成:
                                1.溶液A 25ml 5×STMT(用時按體積比1:4 用滅菌雙蒸水稀釋)
                                2.溶液B 17ml
                                3. 溶液C 0.6ml RNase A
                                4.溶液D 44ml
                                5. 溶液E 1.25ml Resin(用時充分混勻)
                                6. 溶液F 30ml 洗液(用時加入40ml無水酒精,并在瓶蓋“口”中做標記)
                                7.溶液G 5ml TE 緩沖液
                                實驗步驟:
                                (一)新鮮抗凝血或冷凍抗凝血
                                1.取300μl 全血,加入900μl 溶液A,溫和混勻5~6 次。
                                2.室溫或冰浴10min,≥8000rpm 離心20~30 秒,棄上清。
                                注:1)若紅細胞溶解不完全,則沉淀物發(fā)紅,可再加900μl 溶液A,重復(fù)上述步驟一次。
                                2)若全血在使用之前被冷凍,則需重復(fù)步驟1、2 兩次。
                                3.加入300μl 溶液B,溫和振蕩或反復(fù)用移液器吸打白色沉淀物4~6 次,
                                加入10μl 溶液C,室溫放置10min。
                                4.加入800μl 溶液D,20μl 溶液E,混勻,室溫放置5min。
                                5.≥8000rpm 離心30s,棄上清。
                                6.加入500μl 溶液F,充分混勻,≥8000rpm 離心30~60s,棄上清。
                                7.重復(fù)步驟6。
                                8.≥12000rpm 離心1min,吸干剩余液體。室溫放置5~10min。
                                9.加入50~100μl 溶液G,混勻,50℃保溫5~10min,≥12000rpm 離心1min,吸取上清,
                                即為DNA。
                                (二)分離好的白細胞
                                1.取100μl 白細胞,按1:3 的比例直接加入溶液B,充分混勻,加入10μl 溶液C,室溫
                                放置10min。
                                2. 其余接(一)的步驟4。
                                注注意事項:
                                1. 用戶可視DNA 濃度高低,適當調(diào)整溶液G 的量。
                                2. 此方法提取DNA 質(zhì)量非常高,適用于分子生物學任何實驗要求,OD260/280≥1.5,一
                                般情況能達到1.7--1.8,若比值偏低,可能是溶血或儲存時間過長。
                                來源:上海鼎國生物技術(shù)有限公司
                                聯(lián)系電話:021-62837819 52301867 62821297
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