PCR反應，全稱聚合酶鏈式反應，是一種分子生物學技術，能在短時間內(nèi)將特定的DNA序列大量復制。這次實驗我們針對某一特定的基因片段進行了PCR擴增，現(xiàn)在，讓我們揭曉反應結(jié)果。在試管中，我們可以看到明顯的DNA條帶，這表示PCR反應成功，我們成功擴增了目標DNA序列。這個結(jié)果對于我們的研究具有重要意義，它不僅證明了我們的實驗方法的有效性，也為我們后續(xù)的研究提供了重要的參考。一個PCR反應過程分為很多的步驟，包括樣本采集，運輸，核酸提取，qpcr擴增等步驟，因此優(yōu)化PCR反應要素配置及其重要，下面詳細介紹：
 

1、引物及濃度：

①長度：15～30bp。
②堿基：G+C含量以40%～60%為宜，ATGC最好隨機分布，避免5個以上的堿基成串排列。③避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)、兩條引物間互補，特別是3′端的互補。
④引物3′端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個堿基，應嚴格要求配對。
⑤與其它序列無明顯同源性。⑥濃度為0.1～1μmol或10～100pmol。

2、酶及其濃度：

催化一典型的PCR反應約需酶量2.5U（指總反應體積為100μl時），濃度過高可引起非特異性擴增，濃度過低則合成產(chǎn)物量減少。

3、dNTP的質(zhì)量與濃度：

dNTP應為50～200μmol/L，4種dNTP的濃度要相等（等摩爾配制），過高dNTP能與Mg2+結(jié)合，使游離的Mg2+濃度降低。

4、模板：

模板的量與純化程度，是PCR成敗與否的關鍵環(huán)節(jié)之一，避免DNA純化中的SDS和蛋白酶K等雜質(zhì)。

5、Mg2+濃度：

一般的PCR反應中，各種dNTP濃度為200μmol/L時，Mg2+濃度為1.5～2.0mmol/L為宜。Mg2+濃度過高，反應特異性降低，出現(xiàn)非特異擴增，濃度過低會降低Taq DNA聚合酶的活性，使反應產(chǎn)物減少。

6、溫度與時間：

①變性：93℃～94lmin℃，過高或過低的溫度影響酶的活性。②退火：取決于引物的長度、堿基組成及其濃度，還有靶基序列的長度。一般高于Tm值5℃～10℃，時間為30～60s。③延伸：常用溫度為72℃，時間根據(jù)待擴增片段的長度而定。

7、循環(huán)次數(shù)：

主要取決于模板DNA的濃度。一般的循環(huán)次數(shù)選在30～40次，循環(huán)次數(shù)越多，非特異性產(chǎn)物的量亦隨之增多。