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                                                              English | 中文版 | 手機版 企業(yè)登錄 | 個人登錄 | 郵件訂閱
                                                              當前位置 > 首頁 > 技術(shù)文章 > 短串聯(lián)重復序列STR(Short Tandem Repeat)鑒定科普

                                                              短串聯(lián)重復序列STR(Short Tandem Repeat)鑒定科普

                                                              瀏覽次數(shù):1402 發(fā)布日期:2024-7-26  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負
                                                              1,STR簡介:
                                                              STR(Short Tandem Repeat,短串聯(lián)重復序列)基因位點由長度為3~7個堿基對的短串連重復序列組成 ,這些重復序列廣泛存在于人類基因組中,可作為高度多態(tài)性標記,被稱為細胞的DNA指紋。
                                                              2,生產(chǎn)流程:
                                                              STR的生產(chǎn)流程主要包括,樣本收集,DNA抽提,毛細管凝膠電泳,數(shù)據(jù)導出和報告分析,其中比較重要的在于實驗操作過程中的污染質(zhì)控,以及后續(xù)的報告解讀部分。對于需要做申報的公司,運行數(shù)據(jù)的保存也是相當重要的。
                                                               
                                                              圖1,STR整體質(zhì)控流程
                                                              3,鑒定標準和位點:
                                                              參考美國國家標準學會(American National Standard Institute,ANSI) 標準:STR Loci (minimum set)TH01, TPOX, vWA, CSF1PO, D16S539, D7S820, D13S317, and D5S818 Gender marker Amelogenin,采用ATCC公布細胞鑒定金標準8位點+1個性別位點,后續(xù)11個高度多態(tài)性位點輔佐判斷。
                                                               
                                                              圖2,STR位點信息
                                                              4,完整的報告結(jié)果:
                                                              涵蓋一個陽性樣本質(zhì)控峰圖結(jié)果,數(shù)據(jù)庫比對表,標準的STR鑒定報告,毛細管凝膠電泳測序峰圖。其中,陽性質(zhì)控是比較重要的,能確保實驗操作過程中的污染判別,排查實驗操作人員或者環(huán)境中的污染結(jié)果。
                                                              圖3,完整的STR報告結(jié)果
                                                              5,質(zhì)量管理體系:
                                                              上海翼和STR嚴格依據(jù)實驗室質(zhì)控標準:ISO9001質(zhì)量管理體系,CMA司法鑒定標準,建立了完整的質(zhì)量管理體系,從試劑耗材,到實驗操作,數(shù)據(jù)監(jiān)控等方面監(jiān)控實驗數(shù)據(jù)產(chǎn)出,確保數(shù)據(jù)的真實性及可靠性。
                                                               
                                                              圖4,質(zhì)量管理體系
                                                               
                                                              6,數(shù)據(jù)庫比對:
                                                              目前比較常用的數(shù)據(jù)庫包括,美國ATCC細胞庫,德國DSMZ細胞庫,日本JCRB細胞庫,日本Riken細胞庫,國家實驗細胞資源共享平臺,EXPASY數(shù)據(jù)庫結(jié)果。翼和實驗數(shù)據(jù),通過自動檢索軟件,對比德國DSMZ細胞數(shù)據(jù)庫結(jié)果,后續(xù)人員復核依照21位點結(jié)果,比對EXPASY數(shù)據(jù)庫,國家實驗細胞資源共享平臺數(shù)據(jù)作為補充,復查數(shù)據(jù)結(jié)果。
                                                               

                                                              圖5,數(shù)據(jù)庫比對結(jié)果
                                                              7,判讀標準:
                                                              匹配度(EV值)計算公式:=匹配度(%)
                                                              EV值≥1.0,細胞完全匹配參考細胞結(jié)果。
                                                              0.8≤EV值<1.0,細胞基本匹配參考細胞結(jié)果,基本匹配往往伴隨多等位的結(jié)果,需要參考21位點的結(jié)果來判讀是否是交叉污染,還是細胞微衛(wèi)星不穩(wěn)定導致的。
                                                              EV值<0.8,細胞不匹配。
                                                              8,增值服務:
                                                              • 基于QPCR方法的4種屬鑒定結(jié)果,往往是人和小鼠STR鑒定體系檢測不到信號值的情況下,免費幫客戶補測種屬。確保種屬來源正確,或者排查其他種屬源細胞污染的情況。4種屬涵蓋:人,小鼠,大鼠,倉鼠,4個物種。
                                                              • 10種屬鑒定結(jié)果:QPCR原理的種屬檢測服務,后續(xù)根據(jù)客戶意愿決定是否需要排查4種屬外的其他物種結(jié)果。
                                                              • 英文報告:部分公司或者科研單位,尤其發(fā)表論文的老師,需要提供報告的英文報告用于發(fā)表論文。可以聯(lián)系對應銷售人員安排免費出具英文報告結(jié)果。
                                                              • 為期至少一年的數(shù)據(jù)保留,和半年的客戶樣本保留。
                                                              9,STR應用場景:
                                                              1. 常見永生化細胞的鑒定,論文發(fā)表和公司細胞庫建庫。
                                                              2. 細胞培養(yǎng)過程中的交叉污染情況排查。
                                                              3. 干細胞來源一致性比對。
                                                              4. 自主的原代細胞建立,排查污染和原始數(shù)據(jù)保留。
                                                              10,參考文獻:
                                                              1,A resource for cell line authentication, annotation and quality control Nature 520,307–311(16 April 2015)
                                                              2,Cell line misidentification:the beginning of the end Nature Reviews Cancer 10, (June 2010)
                                                              3,American Type Culture Collection Standards Development Organization Workgroup,A.S.N., Cell line misidentification: the beginning of the end. Nat Rev Cancer, 2010. 10(6):p. 441-8.
                                                              4,Reid Y, Storts D, Riss T, Minor L. Authentication of Human Cell Lines by STR DNA Profiling Analysis. Assay Guidance Manual [Internet]. Bethesda (MD): Eli Lilly & Company and the National Center for Advancing Translational Sciences; 2004-.2013 May 1.
                                                               
                                                              發(fā)布者:上海翼和應用生物技術(shù)有限公司
                                                              聯(lián)系電話:021-33559491
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