近期，阿斯利康宣布已經(jīng)成功收購了專注于開發(fā)T細(xì)胞受體療法TCR-T的 Neogene Therapeutics 公司，這無疑給已經(jīng)如火如荼的T細(xì)胞療法領(lǐng)域又助力一把。我國CAR-T細(xì)胞療法的發(fā)展也是高歌猛進(jìn)，國際頂級期刊《柳葉刀》上刊登的文章更是直言CAR-T細(xì)胞治療，將在中國迅速崛起，擁有光明的未來。所以這些療法的核心步驟之一——T細(xì)胞的活化以及放大，自然就是目前研究的熱點(diǎn)。

作為第一個被克隆的細(xì)胞白介素因子，IL-2是免疫治療里的元老級成員，在T細(xì)胞的活化擴(kuò)增的過程中都發(fā)揮著巨大的作用。但是隨著T細(xì)胞療法研究的深入，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子家族中的另一個組合IL-7和IL-15似乎有著不同于IL-2的誘導(dǎo)能力，探尋二者之間的能力差異可以幫助我們在后續(xù)的實驗和操作中優(yōu)化對T細(xì)胞的改造，從源頭改善治療效果并減少不良反應(yīng)。

血液學(xué)方面的頂刊Blood刊登了相關(guān)研究，為了對比IL-2和IL-7/IL-15的組合對CAR-T細(xì)胞擴(kuò)增以及抗腫瘤活性的影響，研究者從免疫治療中炙手可熱的靶點(diǎn)人CD19抗原入手。CD19是B細(xì)胞最可靠的表面生物標(biāo)志物之一，并且與B細(xì)胞的活化、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、及生長調(diào)節(jié)密切相關(guān)【1】�？蒲薪M選取了28例復(fù)發(fā)/難治性B細(xì)胞惡性腫瘤患者的組織，分別使用IL-2和IL-7/IL-15在體外進(jìn)行誘導(dǎo)。

Fig1. 檢測不同培養(yǎng)組的T細(xì)胞增殖能力以及效應(yīng)功能

從流式細(xì)胞術(shù)等實驗結(jié)果，我們可以看出相較于IL-2培養(yǎng)組，IL-7 / IL-15組培養(yǎng)的T細(xì)胞表現(xiàn)出更強(qiáng)的增殖能力以及更好的效應(yīng)功能。這與培養(yǎng)物中CD8(+)CD45RA(+)CCR7(+)亞群密切相關(guān)，這種表型最接近 "T記憶干細(xì)胞"，保留CD45RA和CCR7表達(dá)，通過這種模式增強(qiáng)了CAR-T細(xì)胞的活性和抗腫瘤作用。為了進(jìn)一步證明，實驗組選取了小鼠進(jìn)行體內(nèi)實驗，得到了與體外實驗類似的結(jié)果。IL-2培養(yǎng)組的CAR-T細(xì)胞半衰期短，并在輸注后第3天消失，與此形成鮮明對比的是，IL-7 / IL-15組擴(kuò)增的CAR-T細(xì)胞在輸注后14天仍然可檢測到，并且積聚在腫瘤細(xì)胞躲藏的“老巢”——脊髓中，發(fā)揮更好的殺傷作用【2】。
 

Fig2. 檢測不同培養(yǎng)組的T細(xì)胞在小鼠體內(nèi)持久性和抗腫瘤活性

T細(xì)胞療法的另一員大將TCR-T療法也在IL-2和IL-7 / IL-15培養(yǎng)方面有了新的突破，TCR工程化T細(xì)胞在體內(nèi)的抗腫瘤功效在很大程度上取決于分化程度較低的亞群，例如具有更大擴(kuò)展性和長期持久性的幼稚樣T細(xì)胞（TN）表型的T細(xì)胞。這就需要我們在活化誘導(dǎo)階段選擇適合的細(xì)胞因子，基于這個需求科學(xué)家選取了紐約食管鱗狀細(xì)胞癌-1（NY-ESO-1）來比較補(bǔ)充IL-2或IL-7 / IL-15對T細(xì)胞活化誘導(dǎo)的影響。重點(diǎn)是確定不同細(xì)胞因子混合物對NY-ESO-1特異性T細(xì)胞的活力、擴(kuò)增和T細(xì)胞亞群以及效應(yīng)器官功能的影響。
 

*第一組測試
 

*第二組測試
 

*第三組測試

Fig3. 檢測不同培養(yǎng)組T細(xì)胞活力、擴(kuò)增和轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，特異性T細(xì)胞亞群的分布以及耗竭和歸巢標(biāo)記物
 

從檢測的結(jié)果我們可以發(fā)現(xiàn)在IL-2存在下培養(yǎng)產(chǎn)生的CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞顯著增多，而CD4+Th細(xì)胞顯著減少【3】，綜合分析圖譜我們可以得出結(jié)論，IL-7/IL-15增強(qiáng)了分化程度較低的NY-ESO-1特異性T細(xì)胞的子集。這里我們可以對比在CD19特異性CAR-T細(xì)胞中得到的結(jié)論，使用 IL-7/IL-15培養(yǎng)的CAR-T細(xì)胞，相比于在添加IL-2的培養(yǎng)基下生成的CAR-T細(xì)胞來說，對腫瘤細(xì)胞的裂解率顯著提高。這說明對于T細(xì)胞培養(yǎng)，我們需要根據(jù)研究的具體目的來進(jìn)行劃分，這打破了多年來IL-2金標(biāo)準(zhǔn)的固有印象。

不久前研究公司Adaptimmune Therapeutics宣布，已經(jīng)向美國FDA啟動關(guān)于TCR-T細(xì)胞療法Afami-cel的滾動上市申請，用于治療晚期滑膜肉瘤，有望成為首款針對實體瘤的TCR-T細(xì)胞療法。這是T細(xì)胞療法的又一個里程碑事件。系統(tǒng)的研究IL-2和IL-7 / IL-15對T細(xì)胞的影響，對于T細(xì)胞療法行業(yè)乃至于整個免疫療法的發(fā)展都具有重要的意義，作為免疫療法的主要工具，我們相信在未來T細(xì)胞會為我們解決更多困擾人類的頑疾，保護(hù)人類的生命健康。

同立海源生物研發(fā)生產(chǎn)的GMP級IL-2、IL-7、IL-15可滿足T細(xì)胞藥物開發(fā)、驗證、申報等不同階段的需求。

GMP級產(chǎn)品放行標(biāo)準(zhǔn)（IL-15為例）

重組人 IL-2蛋白（Cat.No.GMP-TL777）活性測試數(shù)據(jù)

02 IL-7
 

重組人IL-7蛋白（Cat.No.GMP-TL506），可刺激PBMC增殖，比活性＞1×10⁷IU/mg(參考標(biāo)準(zhǔn)NIBSC代碼：90/530)

03 IL-15
 

重組人IL-15蛋白（Cat.No.GMP-TL202）可刺激小鼠T淋巴細(xì)胞CTLL-2增殖，比活性＞5×10⁶IU/mg（NIBSC代碼：95/554）

參考文獻(xiàn)：
【1】 Ying Z, Huang XF, Xiang X, Liu Y, Kang X, Song Y, Guo X, Liu H, Ding N, Zhang T, Duan P, Lin Y, Zheng W, Wang X, Lin N, Tu M, Xie Y, Zhang C, Liu W, Deng L, Gao S, Ping L, Wang X, Zhou N, Zhang J, Wang Y, Lin S, Mamuti M, Yu X, Fang L, Wang S, Song H, Wang G, Jones L, Zhu J, Chen SY. A safe and potent anti-CD19 CAR T cell therapy. Nat Med. 2019 Jun;25(6):947-953.

【2】 Xu Y, Zhang M, Ramos CA, Durett A, Liu E, Dakhova O, Liu H, Creighton CJ, Gee AP, Heslop HE, Rooney CM, Savoldo B, Dotti G. Closely related T-memory stem cells correlate with in vivo expansion of CAR.CD19-T cells and are preserved by IL-7 and IL-15. Blood. 2014 Jun 12;123(24):3750-9.

【3】  Gong W, Hoffmann JM, Stock S, Wang L, Liu Y, Schubert ML, Neuber B, Hückelhoven-Krauss A, Gern U, Schmitt A, Müller-Tidow C, Shiku H, Schmitt M, Sellner L. Comparison of IL-2 vs IL-7/IL-15 for the generation of NY-ESO-1-specific T cells. Cancer Immunol Immunother. 2019 Jul;68(7):1195-1209.