細胞培養(yǎng)中預防細胞老化操作方法
細胞老化的概念
生物個體及其細胞需經生長、發(fā)育、老化及死亡等階段，老化是生命發(fā)展的必然，任何細胞從誕生之時起，老化過程就開始了。老化的細胞結構蛋白、酶蛋白和受體蛋白合成減少，攝取營養(yǎng)和修復染色體損傷的能力均下降，表現為細胞和胞核變形，線粒體、高爾基體扭曲或呈囊泡狀，胞質色素沉著，細胞體積縮小，由此導致器官重量減輕，間質增生硬化，功能代謝降低，儲備功能不足。遺傳程序學說：
遺傳程序學說（genetic programmed theory）：認為細胞的老化是由遺傳因素決定的，最終的老化死亡是遺傳信息耗竭的結果。例如體外培養(yǎng)的人成纖維細胞經過50次分裂后便自行停止分裂；同卵雙生子“同生共死”現象等，都支持此學說�，F已了解，控制細胞分裂次數的機制與細胞內染色體末端的端粒結構有關。
細胞老化的基本特征
1. 細胞老化最開始的現象通常為細胞內部會出現空泡（可能是凋亡小體），也可能會出現黑點，大多沿細胞周邊排布，內部中間也可能會顯現一些，但相對周邊為少。
3. 細胞折光性變差，鏡下可見細胞“變薄”，做轉染實驗時，細胞死亡率會較高。但培養(yǎng)液不會發(fā)生迅速變黃的現象，仍清亮。（但如果是細菌污染的話，一般會出現培養(yǎng)液的迅速變黃，混濁，鏡下可見大量繁殖的細菌；若是支原體污染的話，細胞也會失去正常形態(tài)，會有細胞的死亡）。
4. 細胞的貼壁性減弱，開始有細胞漂浮于培養(yǎng)液中。
5. 老化的細胞，表面分泌物會增多，細胞表面的純凈度越來越低。
6. 分裂的細胞數量明顯地減少同時細胞的增殖速度也會大大下降。
7. 細胞開始長角分化。
細胞形態(tài)改變
雖然由于細胞周期的中斷和DNA復制的停止，老化細胞內的DNA含量與正常細胞類似，但 RNA與蛋白質豐度均比正常細胞要明顯升高。這是因為，盡管細胞進入老化階段后蛋白質的整體合成速率降低，但是蛋白質的降解體系受到更加明顯的抑制，導致蛋白質在細胞內持續(xù)堆積。但，由于不同組織來源的細胞，其形態(tài)本就各不相同，因此，目前還并無客觀的、統(tǒng)一的標準從細胞形態(tài)判斷并定義老化細胞。換句話說，目前并不能直接根據細胞的形態(tài)去判斷是否老化細胞。
無論是原代細胞或是細胞株，在細胞培養(yǎng)過程中細胞老化現象是存在且常見的，但卻容易被操作人員忽略，老化的細胞會出現的特征包括：細胞增殖變慢、細胞核體積異常及多核（4-8核）、表面分泌物增多、細胞體積增大、細胞扁平、細胞質中出現空泡等現象。
細胞老化原因總結
1. 細胞老化最開始的現象通常為細胞內部會出現空泡（可能是凋亡小體），也可能會出現黑點，大多沿細胞周邊排布，內部中間也可能會顯現一些，但相對周邊較少；
3. 老化以后的細胞會出現立體感慢慢消失，開始成扁平狀，細胞與細胞之間的間隔減小或混在一起，細胞不再是梭形，而會成為各種不規(guī)則形狀；
4. 細胞折光性變差，鏡下可見細胞“變薄”，做轉染實驗時，細胞死亡率會較高，但培養(yǎng)液不會發(fā)生迅速變黃的現象，仍清亮。（如果是細菌污染的話，一般會出現培養(yǎng)液的迅速變黃，混濁，鏡下可見大量繁殖的細菌；若是支原體污染的話，細胞也會失去正常形態(tài)，會有細胞的死亡）；
5. 細胞的貼壁性減弱，開始有細胞漂浮在培養(yǎng)液中；
6. 老化的細胞表面分泌物會增多，細胞表面的純凈度越來越低；
7. 分裂的細胞數量明顯的減少，同時細胞的增殖速度也會大大下降；
8. 細胞開始長角分化。
細胞培養(yǎng)中如何預防老化
1. 防止細胞老化最主要還是要做到勤觀察、勤換液、勤傳代、勤保種，特別是傳代，不能等細胞太密了之后傳，一般細胞建議長到70％融合度傳代最好；
2. 換培養(yǎng)液應該根據自己細胞消耗培養(yǎng)基的情況來確定是否該換。如果感覺時間不好把握的話就多培養(yǎng)幾瓶細胞，在不同的時間換液，最后再來比較下，看什么時候換液好，得出自己的結論；
4. 在間充質干細胞培養(yǎng)時必然要進行消化，但是消化對細胞的表面蛋白質有很強的破壞作用，因此不能長時間進行消化并且在選擇消化酶時也要選擇較為合適的pH和濃度，不然就會使細胞老化或者分化；
5. 在開始養(yǎng)細胞并傳代時，也要特別注意凍存細胞，以保持細胞有種子庫存在，可以有效避免細胞損傷。
雖然，老化細胞不會立即死亡，但其基因表達會發(fā)生變化，如果細胞老化現象嚴重，建議從種子庫或工作庫重新復蘇細胞。
