一 單細(xì)胞測(cè)序
單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)(scs)是指在單個(gè)細(xì)胞水平上對(duì)其攜帶的遺傳信息進(jìn)行測(cè)序，獲得某種細(xì)胞類型的基因序列等信息并進(jìn)行整合分析，目前廣泛應(yīng)用于新物種鑒定、病原篩查、病原進(jìn)化、發(fā)育生物學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、腫瘤異質(zhì)性研究以及循環(huán)腫瘤細(xì)胞等。該技術(shù)在2013年榮膺《自然-方法》年度技術(shù)。目前主要的方法為10x Genomics。
 
二 單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)實(shí)例
1. 多重退火和成環(huán)循環(huán)擴(kuò)增技術(shù)
主要研發(fā)人：哈佛大學(xué)終身教授、美國(guó)科學(xué)院院士謝曉亮教授
技術(shù)看點(diǎn)：降低PCR擴(kuò)增偏倚，使得單細(xì)胞中93%的基因組能夠被測(cè)序。這種方法使得檢測(cè)單細(xì)胞中較小的DNA序列變異變得更容易，因此能夠發(fā)現(xiàn)個(gè)別細(xì)胞之間的遺傳差異。
 
2. 基于芯片實(shí)驗(yàn)室技術(shù)的單細(xì)胞測(cè)序
主要研發(fā)人：斯坦福大學(xué)Stephen Quake
技術(shù)看點(diǎn)：基于lap on a chip開發(fā)
 
3. 基于MDA的單細(xì)胞測(cè)序
主要研發(fā)人：深圳華大基因研究院
技術(shù)看點(diǎn)：將多重置換擴(kuò)增(MDA)和測(cè)序技術(shù)相結(jié)合
 
4. Strand-seq
主要研發(fā)人：加拿大英屬哥倫比亞大學(xué)Peter Lansdorp
技術(shù)看點(diǎn)：能捕捉DNA一條鏈上的信息，使得研究人員對(duì)于親本DNA模板鏈進(jìn)行DNA測(cè)序，避免單細(xì)胞DNA擴(kuò)增和測(cè)序時(shí)丟失定向信息。
 

• 單細(xì)胞測(cè)序收樣與樣本制備過程中的注意事項(xiàng)

1. 樣本類型：細(xì)胞(植物細(xì)胞需要制備成原生質(zhì)體)、組織(一般需要鮮樣不可冷凍)、血液
2.最適上機(jī)檢測(cè)濃度：7x10⁵-1.2x10⁶個(gè)/ml
3.細(xì)胞活率：細(xì)胞活率大于70%
4. 細(xì)胞大小：小于40μm
5.細(xì)胞結(jié)團(tuán)率：小于10%
 

• Rigel在單細(xì)胞測(cè)序中的應(yīng)用

單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)對(duì)于樣本濃度、活率、結(jié)團(tuán)率有著較高的要求，特別是對(duì)于從組織中消化下來(lái)的細(xì)胞，由于細(xì)胞內(nèi)含有碎片和雜質(zhì)，傳統(tǒng)的計(jì)數(shù)方法不能有效的排除掉碎片和雜質(zhì)在計(jì)數(shù)過程中帶來(lái)的干擾。

Countstar Rigel 全自動(dòng)熒光細(xì)胞分析儀是一款基于圖像法檢測(cè)，配合多熒光通道，通過采集圖像中的細(xì)胞信息，進(jìn)行定量分析。它將熒光顯微成像與統(tǒng)計(jì)學(xué)群體分析結(jié)合于一身，既能提供細(xì)胞群的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，又可以獲得單個(gè)細(xì)胞的圖像，從而提供細(xì)胞形態(tài)學(xué)信息，獨(dú)特的圖像采集同時(shí)產(chǎn)生明場(chǎng)以及熒光圖像，使結(jié)果更為直觀。它結(jié)合AO(吖啶橙)和PI(碘化吡啶)兩種核酸染料(圖1)，可以排除雜質(zhì)和碎片的干擾(圖2)，從而得到準(zhǔn)確的計(jì)數(shù)結(jié)果(圖3)。

 

       
Countstar Rigel應(yīng)用在單細(xì)胞測(cè)序中的文章 文章地址：https://doi.org/10.1016/j.stemcr.2020.09.008