倍性育種,指通過改變?nèi)旧w的數(shù)量,產(chǎn)生不同的變異個體,進而選擇優(yōu)良變異個體培育新品種。正常的配子細胞中所包含的染色體數(shù)或半數(shù)的體細胞染色體數(shù)稱為一套單倍染色體,用符號n 表示。具有一個染色體組的細胞和由這樣的細胞組成的個體稱為單倍體(n) ,具有兩個染色體組的細胞或個體稱為二倍體(2n),具有兩個以上整套染色體組的細胞或個體則稱為多倍體,包括三倍體(3n)、四倍體(4n)等。
傳統(tǒng)的倍性鑒定主要采用常規(guī)壓片法統(tǒng)計染色體數(shù)目,但采用這種方法很難尋找到分裂中期染色體分散良好并可進行計數(shù)的細胞,而且整個過程耗時長,檢測效率低。采用流式細胞術(shù)(Flow Cytometry,F(xiàn)CM)進行倍性分析的方法簡化了倍性分析的過程,可以快速準(zhǔn)確檢測同一物種范圍內(nèi)不同倍性的樣品。FCM作為一項快速、高效的檢測技術(shù),被廣泛應(yīng)用于細胞分類學(xué)、植物遺傳學(xué)及植物生理學(xué)等研究領(lǐng)域中。FCM常被用于鑒定植物倍性水平,通過檢測植株G0/G1峰的細胞核DNA含量可以判斷出植物的倍性。
實驗原理
首先需要裂解液將組織中細胞核釋放出來,并打開DNA鏈,然后用DAPI染液將細胞核DNA上的A-T
堿基對特異性染色,再用儀器檢測出被染色的A-T堿基對發(fā)出的熒光強度。比如二倍體的熒光強度是100(橫坐標(biāo)),那么單倍體的熒光強度就是50(橫坐標(biāo))?v坐標(biāo)是細胞數(shù)量的顯示,通常來說,信號峰高說明信號比較好,雜質(zhì)少。