雙人源化小鼠的基因功能簡介
4-1BB基因功能簡介
TNFRSF9（TNF receptor superfamily member 9）為TNF受體超家族成員，也稱為CD137或4-1BB，主要表達(dá)在活化的T細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞表面。通過連接其配體CD137L或利用激活型CD137單克隆抗體激活CD137，既能提供共刺激信號(hào)激活T細(xì)胞，使T細(xì)胞活化增殖并分泌細(xì)胞因子，同時(shí)它介導(dǎo)的共刺激信號(hào)能夠誘導(dǎo)抗原提呈細(xì)胞增殖并分泌細(xì)胞因子。許多實(shí)驗(yàn)表明干預(yù)CD137共刺激途經(jīng)可以調(diào)節(jié)T細(xì)胞和抗原提呈細(xì)胞的功能產(chǎn)生抗腫瘤免疫作用，為腫瘤免疫治療提供了新的靶點(diǎn)。
基本信息
打靶策略
表型分析
B-hPD-1/h4-1BB小鼠蛋白表達(dá)分析
結(jié)果顯示：在C57BL/6小鼠中可檢測到m4-1BB+細(xì)胞。在B-hPD-1/h4-1BB純合鼠中，可檢測到h4-1BB+細(xì)胞。
結(jié)果顯示：在C57BL/6小鼠中可檢測到mPD-1+細(xì)胞。在B-hPD-1/h4-1BB純合鼠中，可檢測到hPD-1+細(xì)胞。
脾臟免疫細(xì)胞分型
流式細(xì)胞術(shù)檢測野生型C57BL/6小鼠和B-hPD-1/h4-1BB小鼠(n=3)脾臟中免疫細(xì)胞分型，結(jié)果顯示：純合B-hPD-1/h4-1BB小鼠免疫細(xì)胞分型與野生型小鼠相似。說明其T、B、NK、DC、粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的分化未受到PD-1和4-1BB基因人源化的影響。
脾臟T細(xì)胞分型
流式細(xì)胞術(shù)檢測野生型C57BL/6小鼠和B-hPD-1/h4-1BB小鼠（n=3）脾臟淋巴細(xì)胞中的T細(xì)胞亞群比例。結(jié)果顯示：純合B-hPD-1/h4-1BB小鼠與野生型C57BL/6小鼠淋巴細(xì)胞亞群有相似分布，說明其T細(xì)胞分化未受到PD-1和4-1BB基因人源化的影響。
血液免疫細(xì)胞分型
流式細(xì)胞術(shù)檢測野生型C57BL/6小鼠和B-hPD-1/h4-1BB小鼠(n=3)血液免疫細(xì)胞分型，結(jié)果顯示：純合B-hPD-1/h4-1BB小鼠免疫細(xì)胞分型與野生型小鼠相似。說明其T、B、NK、DC、粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的分化未受到PD-1和4-1BB基因人源化的影響。
血液T細(xì)胞分型
流式細(xì)胞術(shù)檢測野生型C57BL/6小鼠和B-hPD-1/h4-1BB小鼠（n=3）血液淋巴細(xì)胞中的T細(xì)胞亞群比例。結(jié)果顯示：純合B-hPD-1/h4-1BB小鼠與野生型C57BL/6小鼠淋巴細(xì)胞亞群有相似分布，說明其T細(xì)胞分化未受到PD-1和4-1BB基因人源化的影響。
血常規(guī)檢測
血常規(guī)檢測野生型C57BL/6小鼠和B-hPD-1/h4-1BB小鼠（n=3）。結(jié)果顯示：純合B-hPD-1/h4-1BB小鼠與野生型C57BL/6小鼠血常規(guī)檢測值相似。
血生化檢測
血生化檢測野生型C57BL/6小鼠和B-hPD-1/h4-1BB小鼠（n=3）。結(jié)果顯示：純合B-hPD-1/h4-1BB小鼠與野生型C57BL/6小鼠血常規(guī)檢測值相似。
抗體藥效驗(yàn)證
1、基于小鼠結(jié)腸癌的腫瘤模型
將小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞MC38移植到B-hPD-1/h4-1BB純合小鼠皮下，待腫瘤體積約150±50mm3時(shí)將動(dòng)物入組至對(duì)照組和治療組(n=6) 。
結(jié)果顯示：聯(lián)合應(yīng)用抗人PD-1抗體Keytruda和抗人4-1BB抗體Urelumab 對(duì)腫瘤生長的抑制作用強(qiáng)于分別單用兩種抗體藥的藥效。A. 腫瘤平均體積±SEM，B. 小鼠平均體重±SEM。結(jié)果證明：B-hPD-1/h4-1BB純小鼠是評(píng)估聯(lián)合應(yīng)用人PD-1和人4-1BB抗體體內(nèi)藥效的有力工具。
2、基于小鼠黑色素瘤的腫瘤模型
結(jié)果顯示：聯(lián)合應(yīng)用抗人PD-1抗體Keytruda和抗人4-1BB抗體Urelumab 對(duì)腫瘤生長的抑制作用強(qiáng)于分別單用兩種抗體藥的藥效。A. 腫瘤平均體積±SEM，B. 小鼠平均體重±SEM。結(jié)果證明：B-hPD-1/h4-1BB純小鼠是評(píng)估聯(lián)合應(yīng)用人PD-1和人4-1BB抗體體內(nèi)藥效的有力工具。
3、基于小鼠淋巴瘤的腫瘤模型
結(jié)果顯示：聯(lián)合應(yīng)用抗人PD-1抗體Keytruda和抗人4-1BB抗體Urelumab 對(duì)腫瘤生長的抑制作用強(qiáng)于分別單用兩種抗體藥的藥效。A. 腫瘤平均體積±SEM，B. 小鼠平均體重±SEM。結(jié)果證明：B-hPD-1/h4-1BB純小鼠是評(píng)估聯(lián)合應(yīng)用人PD-1和人4-1BB抗體體內(nèi)藥效的有力工具。
參考資料
Gonzalez, P.A., et al. Modulation of tumor immunity by soluble and membrane-bound molecules at the immunological synapse. Clin Dev Immunol 2013, 450291 (2013).
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