無論是原代細(xì)胞還是細(xì)胞系或癌細(xì)胞，細(xì)胞長滿瓶后，需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代或?qū)⒓?xì)胞收集起來用作其他實(shí)驗(yàn)。貼壁生長的細(xì)胞必須要做的一步便是消化過程，下面便對(duì)細(xì)胞消化、中和、洗滌等過程做個(gè)簡單介紹。

1、絕大部分細(xì)胞消化的時(shí)候是只需用胰酶潤洗一遍即可，吸去胰酶后，殘留胰酶附著在細(xì)胞表面在37度一般不到2min足夠消化細(xì)胞（絕大部分1min不到）。對(duì)于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞，這樣連續(xù)傳代，對(duì)細(xì)胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去，胰酶潤洗吸去，然后37度消化。

2、什么算是消化好了呢？

不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才算消化好了，一般肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動(dòng)了，多半呈沙狀移動(dòng)，其實(shí)已經(jīng)可以了，很多人喜歡把細(xì)胞消化或者吹打成完全分離細(xì)胞，這是沒有必要的。一般能移動(dòng)了，就應(yīng)該停止消化，不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。細(xì)胞就是完全成單個(gè)細(xì)胞懸液，之后在貼壁的過程中仍然會(huì)聚集，這個(gè)是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，尤其是腫瘤細(xì)胞的一個(gè)特性。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來，這個(gè)時(shí)候即使是成片的，吹打不超過20次后（一般10次即可），成小規(guī)模聚集（10個(gè)細(xì)胞左右），是正常的，不要試圖再去延長消化時(shí)間。

3、EDTA的作用。

許多人不用胰酶，只用EDTA，或者用trypsin/EDTA聯(lián)合作用。這里要明白，trypsin切割細(xì)胞外基質(zhì)的一些負(fù)責(zé)粘連和附著的蛋白，而EDTA通過螯合Ca2+，作用于Integrin的活性，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在trypsin里添加一些EDTA，或者對(duì)付特別難消化的細(xì)胞，添加多一些EDTA，就是這個(gè)道理。一般不要試圖延長消化時(shí)間（如果10min還消化不徹底的話），而應(yīng)該想其它辦法。針對(duì)如上情況，美國ScienCell公司專門配制了胰酶濃度為0.25%的trypsin/EDTA消化液（T/E，貨號(hào)# 0103）和胰酶濃度為0.05%的trypsin/EDTA消化液（T/E，貨號(hào)# 0183）

4、PBS洗滌。

消化之前用PBS洗滌，是常見的操作，因?yàn)镾erum含有抑制trypsin的蛋白。對(duì)于一些難消化的細(xì)胞，可以配制不含Ca2+、Mg2+的PBS，因?yàn)檫@些離子也會(huì)抑制trypsin的活性。美國ScienCell公司也有配好的不含Ca2+、Mg2+的PBS，即DPBS（貨號(hào)#0303）。

5、胰酶的中和。

細(xì)胞消化完之后，因?yàn)闅埩舻囊让笇?duì)細(xì)胞有傷害作用，需要將胰酶中和掉，就需要用到胰酶中和液。美國ScienCell的胰酶中和液（TNS，貨號(hào)#0113）,含有10%的胎牛血清作為胰酶抑制劑和細(xì)胞保護(hù)劑。電話13683626447