纖維素酶（cellulase，CL）/羧甲基纖維素酶活性測(cè)定 試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管/24 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

CL（EC 3.2.1.4）存在于細(xì)菌、真菌和動(dòng)物體內(nèi)，能夠催化纖維素降解，是一類可廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、棉紡、環(huán)保及可再生資源利用等領(lǐng)域的酶制劑。

測(cè)定原理： 

采用蒽酮比色法測(cè)定CL催化羧甲基纖維素鈉降解產(chǎn)生的還原糖的含量。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、濃硫酸和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存； 試劑一：液體 6mL×1 瓶，4℃保存； 試劑二：液體 40mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存； 臨用前加入 5mL 蒸餾水和 45mL 濃硫酸充分溶解待用。

樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量

（10⁴ 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

3、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 620nm，蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表（在 EP 管中依次加入下列試劑）：

37℃振蕩反應(yīng) 1h 后，90℃水浴 15min（蓋緊，防止水分散失），冷卻后

8000g 25℃離心 10min，取上清，得糖化液

混勻， 90℃水浴 10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻，620nm 處蒸餾水調(diào)零，測(cè)定吸光值

A，計(jì)算 ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。