1、 原理及用途
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)番茄醬、辣椒醬、蛋等樣本中的蘇丹紅（Sudan，SUD），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí)，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的蘇丹紅和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗蘇丹紅抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含蘇丹紅含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中蘇丹紅的殘留量。

2、 技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度：0.3ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式：25℃，30min～30min～15min
2.3 檢測(cè)下限：
番茄汁/番茄醬/辣椒醬………………12ppb
辣椒粉(辣椒面）/飼料………………120ppb
蛋類(lèi)(雞蛋、鴨蛋、鵝蛋）……………30ppb
2.4 交叉反應(yīng)率：
蘇丹紅…………………………………100%
對(duì)位紅…………………………………123%
羅丹明…………………………………8%
2.5 樣本回收率：
番茄汁/番茄醬/辣椒醬…………80% ±15%
辣椒粉(辣椒面）/飼料…………95% ±15%
蛋類(lèi)(雞蛋、鴨蛋、鵝蛋） ……80% ±15%

3、 試劑盒組成
酶標(biāo)板……………………………96孔
高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液1瓶（1ml/瓶）： 1.0ppm（高標(biāo)準(zhǔn)液有揮發(fā)性，需注意密封）
標(biāo)準(zhǔn)品溶液0ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb、24.3ppb（均為空瓶子，現(xiàn)配現(xiàn)用，）。
酶標(biāo)記物（紅蓋）……………………11ml
抗體工作液（藍(lán)蓋）…………………5.5ml
底物液A（白蓋）……………………6ml
底物液B（黑蓋）……………………6ml
終止液（黃蓋）………………………6ml
20×濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml
說(shuō)明書(shū)…………………………………1份
蓋板膜…………………………………1張
自封袋…………………………………1個(gè)

4、 需要的器材和試劑
4.1 儀器：酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）
4.2 微量移液器：?jiǎn)蔚?0µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl
4.3 試劑：甲醇

5、 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知：
實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5.2 配液：
配液1：10%甲醇
取10ml甲醇加入90ml去離子水中，混勻，密閉備用。
配液2：工作洗滌液
將濃縮洗滌液20倍稀釋(1份洗滌液加19份去離子水)。
5.3 樣本前處理步驟：
5.3.1 番茄汁、番茄醬、辣椒醬
1）稱(chēng)取2g±0.05g均質(zhì)樣品于離心管中，加入10ml甲醇，振蕩5分鐘，室溫下4000轉(zhuǎn)/分鐘以上離心10分鐘；
2）取100µl上清液與700µl去離子水混勻；
3）取50µl用于分析。  
    樣本稀釋倍數(shù)：40    檢測(cè)下限：12ppb
5.3.2 辣椒粉、飼料
1）稱(chēng)取1g±0.05g樣本于離心管中，加入10ml甲醇，振蕩5分鐘，室溫下4000轉(zhuǎn)/分鐘以上離心10分鐘；
2）取20µl上清液與780µl 10%甲醇混勻；
3）取50µl液體用于分析。
    樣本稀釋倍數(shù):400    檢測(cè)下限：120ppb  
5.3.3 蛋類(lèi)(雞蛋、鴨蛋、鵝蛋）
1）用均質(zhì)器低速均質(zhì)蛋類(lèi)樣本（熟蛋取樣蛋黃，生蛋取樣全蛋）；
2）稱(chēng)取1g±0.05g均質(zhì)后蛋類(lèi)樣本于離心管中，加入9ml甲醇，振蕩5分鐘（劇烈振蕩，將成團(tuán)樣本振散開(kāi)并充分混勻），15℃ 4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘；
3）取100µl上清液與900µl去離子水混勻；
4）取50µl用于分析。
    樣本稀釋倍數(shù):100    檢測(cè)下限：30ppb  
備注：如樣品嚴(yán)重污染、較多雜質(zhì)或殘留物嚴(yán)重超標(biāo)，應(yīng)進(jìn)
一步稀釋后重新分析。

6、 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前需配制標(biāo)準(zhǔn)品液；低濃度的標(biāo)準(zhǔn)品不穩(wěn)定（有光會(huì)降解，配制時(shí)需用深色瓶子），需現(xiàn)配現(xiàn)用。
在0ppb的瓶中加10%甲醇3ml，0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb的瓶中分別加10%甲醇2ml，24.3ppb的瓶中加10%甲醇2.93ml。
標(biāo)準(zhǔn)品液6：取1.0ppm高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液73ul加入裝有2.93ml 10%甲醇的24.3ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為24.3ppb。
標(biāo)準(zhǔn)品液5：取1ml標(biāo)準(zhǔn)液6加入裝有2ml 10%甲醇的8.1ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為8.1ppb。
標(biāo)準(zhǔn)品液4：取1ml標(biāo)準(zhǔn)液5加入裝有2ml 10%甲醇的2.7ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為2.7ppb。
標(biāo)準(zhǔn)品液3：取1ml標(biāo)準(zhǔn)液4加入裝有2ml 10%甲醇的0.9ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為0.9ppb。
標(biāo)準(zhǔn)品液2：取1ml標(biāo)準(zhǔn)液3加入裝有2ml 10%甲醇的0.3ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為0.3ppb。
標(biāo)準(zhǔn)品液1：直接使用10%甲醇的，濃度即為0ppb。
6.1 編    號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加抗體工作液50µl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光反應(yīng)30分鐘。
6.3 洗    滌：小心揭開(kāi)蓋板膜，甩去孔內(nèi)液體，每孔加350µl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干（用吸水紙拍干，拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6.4 加酶反應(yīng)：加酶標(biāo)記物100µl/孔，25℃避光反應(yīng)30分鐘。
6.5 洗    滌：同上
6.6 顯    色：加底物液A 50µl/孔，再加底物液B 50µl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘（若藍(lán)色過(guò)淺，可適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間）。
6.7 終    止：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。
6.8 測(cè)吸光值：用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm）。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。

7、 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計(jì)算
    標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即

百分吸光度值（%）＝	A	×100%
	A0

A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度（ppb）的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來(lái)電索�。�

8、 注意事項(xiàng)
8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫（25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
8.2 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
8.3 混合要均勻，洗板要徹底，在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性。
8.4 在所有孵育過(guò)程中，用蓋板膜封住微孔板，避免光線照射。
8.5 不要使用過(guò)了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A450nm< 0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚。

9、 貯藏及保存期
儲(chǔ)藏條件：試劑盒于2-8℃保存，避免冷凍。
保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。