本試劑盒僅供研究使用。   

使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定相關(guān)液體樣本中游離膽固醇(fCHOL)的含量。

實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定標(biāo)本中游離膽固醇(fCHOL)水平。用純化的游離膽固醇(fCHOL)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入游離膽固醇(fCHOL)，和HRP標(biāo)記的游離膽固醇(fCHOL)抗原，使它們競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的游離膽固醇(fCHOL)的含量呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中游離膽固醇(fCHOL)的含量。  

試劑盒組成

1	30倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	8	標(biāo)準(zhǔn)品S1（80μmol/L）	0.5ml×1瓶
2	酶標(biāo)試劑	6ml×1瓶		標(biāo)準(zhǔn)品S2（40μmol/L）	0.5ml×1瓶
3	酶標(biāo)包被板	12孔×8條		標(biāo)準(zhǔn)品S3（20μmol/L）	0.5ml×1瓶
4	顯色劑A液	6ml×1瓶		標(biāo)準(zhǔn)品S4（10μmol/L）	0.5ml×1瓶
5	顯色劑B液	6ml×1瓶		標(biāo)準(zhǔn)品S5（5μmol/L）	0.5ml×1瓶
6	終止液	6ml×1/瓶	9	說(shuō)明書(shū)	1份
7	樣品稀釋液	6ml×1/瓶	10	封板膜	2張

 
標(biāo)本要求 
1．標(biāo)本處理：（1）水樣   采集后經(jīng) -20℃反復(fù)凍融三次，再經(jīng)玻璃纖維過(guò)濾后，備查
（2）組織   樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相關(guān)文獻(xiàn)提取進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，備查
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

• 加樣：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔中加50微升，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
• 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。   
• 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
• 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
• 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

 
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請(qǐng)避光保存。
7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

檢測(cè)范圍：2μmol/L -90μmol/L
規(guī)格：96份/盒

保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月