河豚毒素ELISA試劑盒使用說明書
河豚毒素ELISA檢測試劑盒使用說明書
貨號：Ounuo97001
貨號：Ounuo97001
本品采用競爭性酶免檢測技術用于鲀魚類肌肉、肝臟、皮膚等樣本中河豚毒素的定量分析，最大可滿足96次測試，在做復孔的情況下，一次最多可檢測42個樣本。
產品特性：
快速（＜30min）、高回收（≥80%）和高效的前處理方法
高靈敏度（1.5μg/kg,或ppb）和檢測限低（30μg/kg，或ppb）
快速，檢測時間＜1.5h
高的重現(xiàn)性
檢測限：
魚肉、肝臟、魚皮：30μg/kg
定量限：
魚肉、肝臟、魚皮：50μg/kg
一、使用須知：
- 當與儀器方法結果相比時，試劑盒的結果偏高這是很正常的現(xiàn)象。因為儀器方法僅測量的單一化合物，而試劑盒中的抗體由于不僅能識別目標分子且還能識別結構上相似的分子，包括其相關的代謝產物。因此，使用人員需要明白本產品的局限性和對數據做出合理的分析。
- 任何試劑、檢測程序的改變都可能導致檢測失敗。
- 不要使用超過有效期的產品；不同批次的產品不得混用。
- 實驗用水的質量很重要，請使用蒸餾水或去離子水。
- 微孔板開封后，需置于有干燥劑的密封袋中冷藏保存，建議于一個月內使用完。
酶標儀：配備450nm波長
單道移液器：0.5-10、20-200、100-1000μL、0.5-5mL量程各一支
多道移液器：30-300μL量程一支
白色、黃色和藍色吸頭若干
恒溫培養(yǎng)箱
恒溫培養(yǎng)箱
均質器或絞肉機
恒溫水浴鍋
甲醇，分析純
乙酸，分析純
三、樣本前處理：一般來說，組織樣本在2-8℃最多保存1-2天，如長時間不用，建議分裝成適量小份于-20或-80℃保存，請勿使用反復凍融的樣本�！咀⑨專簭U棄的陽性樣本應作為有毒廢棄物處理】
準備
(1) 樣本提取液
分別量取甲醇40mL、蒸餾水60mL、冰乙酸0.1mL混勻。
(2) 1×樣本稀釋液
按1份體積4×樣本稀釋液和3份體積的蒸餾水混勻。
魚肉、肝臟、魚皮
(1) 稱取2g均質的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋30s;
(2) 放置于90℃水浴中10min，期間手搖樣本3次；
(3) 自來水降溫1min，加入1mL正己烷渦旋30s；4000rpm，離心5min；
(4) 取中間層清液100μL，加入300μL 1×樣本稀釋液混勻，取50μL點樣
稀釋倍數：20
四、檢測步驟
四、檢測步驟
檢測前準備
所有試劑需回復至室溫（在20-25℃下，從試劑盒中取出并放置1-2h）;
檢測開始前需準備好所需試劑；
取出所需體積的試劑，其余放回盒內；
未使用完的試劑請勿倒回原試劑瓶內，移取每一種試劑需更換吸頭，以免交叉污染；
請不要在通風口、陽光直射下檢測，以避免造成微孔微環(huán)境差異導致檢測失�。�
標準品、陽性樣本以及用過的吸頭和器皿均應做有毒廢棄物處理。
檢測前準備
所有試劑需回復至室溫（在20-25℃下，從試劑盒中取出并放置1-2h）;
檢測開始前需準備好所需試劑；
取出所需體積的試劑，其余放回盒內；
未使用完的試劑請勿倒回原試劑瓶內，移取每一種試劑需更換吸頭，以免交叉污染；
請不要在通風口、陽光直射下檢測，以避免造成微孔微環(huán)境差異導致檢測失��；
標準品、陽性樣本以及用過的吸頭和器皿均應做有毒廢棄物處理。
洗液（1×）配制
取1體積的20×濃縮洗液，加入19體積的去離子水或蒸餾水混勻
檢測步驟
(1) 移取50μL河豚毒素標準品至相應微孔中；
(2) 移取50μL樣本至相應微孔中；
(3) 移取50μL酶結合物至所有微孔中；
(4) 加入50μL河豚毒素抗體至每一所需微孔中，用手指肚輕輕敲擊微孔板架兩側混勻1min；
(5) 室溫（20-25℃）孵育30min；
(6) 甩干微孔板，加入300μL 洗液（1×），浸泡5s后倒出洗液，再重復4次，甩干并于無塵布上拍干；
(7) 加入100μL底物，室溫（20-25℃）避光孵育15min;
(8) 加入100μL終止液，于450nm下讀數
五、結果計算
（1）以logit(B/B0）為y軸，以log（分析物濃度）為x，進行線性擬合。
其中公式如下
logit(B/B0)=k ln〖(concentration)+c〗①
B為標準品或樣本對應的吸光度；
B0為零標準品對應的吸光度；
logit(B/B0)=〖ln(〗〖(B/B0)/(1-B/B0))〗;
K為斜率；
C為截距
（2）計算出樣本的平均吸光度和樣本的B/B0值代入公式①中求出濃度并乘以對應的稀釋倍數，即為樣本中待測物最終濃度
六、產品組成
六、產品組成
| 組分 | 數量 | 組分 | 數量 | |
| 預包被微孔板 | 96孔（8孔*12條） | 河豚毒素抗體 | 6mL | |
| 河 豚 毒 素 標 準 品 |
0 | 1mL | 酶結合物 | 6mL |
| 1.5ng/mL | 1mL | 4×樣本稀釋液 | 12mL | |
| 4.5ng/mL | 1mL | 20 x 洗液 | 30mL | |
| 13.5ng/mL | 1mL | 終止液 | 12mL | |
| 40.5ng/mL | 1mL | 底物（含TMB） | 12mL | |
| 說明書/質控報告 | 各1份 | |||
| 板貼 | 1張 | |||
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