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                                                              English | 中文版 | 手機(jī)版 企業(yè)登錄 | 個(gè)人登錄 | 郵件訂閱
                                                              當(dāng)前位置 > 首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 活細(xì)胞或死細(xì)胞活性測(cè)定原理和優(yōu)點(diǎn)

                                                              活細(xì)胞或死細(xì)胞活性測(cè)定原理和優(yōu)點(diǎn)

                                                              瀏覽次數(shù):281 發(fā)布日期:2024-3-27  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
                                                              用于定義細(xì)胞活力的參數(shù),例如細(xì)胞膜完整性、線(xiàn)粒體膜電位和細(xì)胞內(nèi)脂酶活性,可以共同用于區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞群,確定細(xì)胞活力,并篩選化合物的細(xì)胞毒性。這些參數(shù)構(gòu)成了一些策略的基礎(chǔ),例如我們的Live or Dead細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒,該試劑盒結(jié)合了兩種熒光探針:活細(xì)胞脂酶底物和細(xì)胞不可滲透的DNA結(jié)合染料,以在樣品中實(shí)現(xiàn)兩種顏色的活細(xì)胞和死細(xì)胞區(qū)分。Live or Dead 檢測(cè)可用于通過(guò)熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀或熒光測(cè)定法檢查真核細(xì)胞和細(xì)菌。
                                                               
                                                              Live or Dead細(xì)胞活性測(cè)定原理
                                                              AAT Bioquest的 Live or Dead細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒是基于使用兩種熒光探針同時(shí)測(cè)定活細(xì)胞和死細(xì)胞�;罴�(xì)胞的標(biāo)記使用酮酸酯(Acetoxymethyl,AM)衍生物的草銨綠(calcein)或線(xiàn)粒體膜電位探針,而死細(xì)胞的標(biāo)記使用細(xì)胞不可滲透的DNA結(jié)合染料。酮酸酯衍生物是非熒光脂酶底物,很容易擴(kuò)散穿過(guò)完整的細(xì)胞膜并滲透到活細(xì)胞中。一旦進(jìn)入細(xì)胞,非特異性細(xì)胞內(nèi)脂酶將底物水解為熒光產(chǎn)物,將其固定在細(xì)胞內(nèi)。底物發(fā)出的熒光信號(hào)是活細(xì)胞具有脂酶活性和完整膜的指示器。另外,線(xiàn)粒體膜電位探針也可用于區(qū)分活細(xì)胞。這些可滲透膜的陽(yáng)離子染料被 passively 沿著細(xì)胞膜擴(kuò)散,并在健康細(xì)胞的線(xiàn)粒體內(nèi)積累,產(chǎn)生顯著的熒光信號(hào)。相反,失去線(xiàn)粒體膜電位的死細(xì)胞將排除該染料,并且不會(huì)觀察到信號(hào)。這種細(xì)胞不可滲透的DNA結(jié)合染料選擇性的與DNA結(jié)合,具有高親和力,只能穿透死細(xì)胞受損的膜,并在與核酸結(jié)合后會(huì)發(fā)出明顯的熒光。然而,具有完整細(xì)胞膜的健康活細(xì)胞將阻止該染料進(jìn)入細(xì)胞,從而產(chǎn)生負(fù)信號(hào)。由于細(xì)胞活性的測(cè)定取決于這些物理特性,不影響這些參數(shù)的細(xì)胞毒性事件可能無(wú)法準(zhǔn)確地使用這些方法評(píng)估。
                                                               
                                                              Live or Dead真核細(xì)胞檢測(cè)
                                                              Live or Dead細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒“紅/綠雙色熒光”
                                                               
                                                              Live or Dead細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒“紅/綠雙熒光”是一種快速簡(jiǎn)便的試劑盒,用于準(zhǔn)確測(cè)定真核細(xì)胞中的細(xì)胞活力和細(xì)胞毒性。該試劑盒包含兩種探針:CytoCalcein Green和碘化丙錠,可以同時(shí)添加到樣品中,通過(guò)雙熒光區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞,而無(wú)需任何洗滌步驟。CytoCalcein Green是一種熒光脂酶底物,可以用綠色熒光標(biāo)記具有脂酶活性的活細(xì)胞,同時(shí),碘化丙錠是一種不可滲透細(xì)胞膜的核酸染料,可以用紅色熒光標(biāo)記死細(xì)胞。該試劑盒可以輕易適用于各種熒光平臺(tái)的高通量測(cè)定,包括熒光酶標(biāo)儀,成像系統(tǒng)和流式細(xì)胞儀,并且與3D細(xì)胞培養(yǎng)模型、球體、貼壁細(xì)胞、非貼壁細(xì)胞和某些組織兼容。與其他評(píng)估細(xì)胞活力的替代方法(如臺(tái)盼藍(lán)排除實(shí)驗(yàn)或鉻釋放實(shí)驗(yàn))相比,相比,Live or Dea 細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒在定義細(xì)胞毒性事件方面更安全、更經(jīng)濟(jì)、更敏感。

                                                               

                                                              圖1.活細(xì)胞或死細(xì)胞活性的影像學(xué)檢測(cè)。用Live或Dead細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒分析90%活細(xì)胞,0%固定細(xì)胞和兩個(gè)細(xì)胞的混合物(活/固定=50/50),并用熒光顯微鏡在FITC和TRITC通道中成像。
                                                               
                                                              Live or Dead細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒“紅/綠雙色熒光”優(yōu)點(diǎn):
                                                              1. 對(duì)活細(xì)胞和死細(xì)胞進(jìn)行穩(wěn)定且有選擇性的雙熒光染色;
                                                              2. 該試劑盒采用快速簡(jiǎn)單的一步染色程序,可以同時(shí)添加兩種探針;
                                                              3. 無(wú)需洗滌使其非常適合高通量篩選應(yīng)用;
                                                              4. 該試劑盒可通過(guò)熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)和熒光酶標(biāo)儀檢測(cè);
                                                              5. 適用于貼壁和非貼壁細(xì)胞。
                                                               
                                                              Live or Dead細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒“紅/藍(lán)雙色熒光”
                                                              Live or Dead細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒“紅/藍(lán)雙色熒光”是一種方便的試劑盒,基于細(xì)胞膜完整性和線(xiàn)粒體膜電位活性來(lái)確定細(xì)胞活力和細(xì)胞毒性。該試劑盒具有兩種探針CellbriteTM Red和Nuclear BlueTM DCS1,可以同時(shí)添加到樣品中,用于活細(xì)胞和死細(xì)胞的雙色熒光測(cè)定。ellbriteTM Red能夠?qū)⒕哂谢钴S線(xiàn)粒體的活細(xì)胞染成紅色,而不可滲透膜的DNA染料Nuclear BlueTM DCS1將死細(xì)胞染成藍(lán)色。該試劑盒可以輕松適用于多種熒光平臺(tái)的高通量分析,如熒光酶標(biāo)儀分析,免疫細(xì)胞化學(xué),成像與流式細(xì)胞術(shù),并且與3D細(xì)胞培養(yǎng)模型、球體、貼壁細(xì)胞和非貼壁細(xì)胞兼容。

                                                               
                                                              圖2.Live or Dead 細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒(雙熒光)(Cat#22788)標(biāo)記的HeLa細(xì)胞的熒光圖像。HeLa細(xì)胞以每孔100,000個(gè)細(xì)胞/100 µL的密度在96孔黑壁/透明底板上過(guò)夜培養(yǎng)。細(xì)胞在37°C下用0-1 µM的staurosporine(SS)處理4小時(shí)(A-D),或者用乙醇固定(E),然后與染料加載溶液孵育1小時(shí)。分別使用Texas Red或Cy5濾光片測(cè)量活細(xì)胞(紅色)和死亡細(xì)胞(藍(lán)色)的熒光信號(hào)。相應(yīng)的熒光信號(hào)使用FlexStation®熒光酶標(biāo)儀(Molecular Devices)在底部讀取模式下進(jìn)行測(cè)量,波長(zhǎng)分別為Ex/Em = 610/650(Cutoff=630 nm,紅色)和Ex/Em = 360/450(cutoff=420 nm,藍(lán)色)。
                                                               
                                                              表1.真核細(xì)胞Live or Dead 細(xì)胞活性測(cè)定選擇指南
                                                              產(chǎn)品名稱(chēng) 探針 Ex/Em(nm) Em顏色 應(yīng)用領(lǐng)域 規(guī)格 貨號(hào)
                                                              Live or Dead細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒*綠色/紅色雙熒光* CytoCalcein綠色碘化丙錠 494/514
                                                              537/618
                                                              綠色(活)
                                                              紅色(死)
                                                              FC.FM或MA1 200Tests 22789
                                                              Live or Dead細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒*綠色/紅色雙熒光* CytoCalcein綠色碘化丙錠 494/514
                                                              537/618
                                                              綠色(活)
                                                              紅色(死)
                                                              FC.FM或MA1 1000Tests 22760
                                                              Live or Dead細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒*藍(lán)色/紅色雙熒光* Cellbrite紅核藍(lán) DSC1 613/631
                                                              348/469
                                                              紅色(活)
                                                              藍(lán)色(死)
                                                              FC.FM或MA1 200Tests 22788
                                                              1. FC=流式細(xì)胞術(shù) FM=熒光顯微鏡 MA=微孔板測(cè)定
                                                               
                                                              Live or Dead細(xì)菌檢測(cè)
                                                              MycoLight熒光活/死細(xì)菌成像試劑盒
                                                               
                                                              MycoLight熒光活/死細(xì)菌成像試劑盒提供了一種快速簡(jiǎn)便的方法來(lái)區(qū)分懸浮或固定在濾膜上的活細(xì)菌或死細(xì)菌。該試劑盒包含兩種探針:MycoLight520和碘化丙錠,可以同時(shí)添加到細(xì)菌樣品中,無(wú)需任何洗滌步驟,非常適合高通量篩選。MycoLight520是一種能穿透細(xì)菌質(zhì)膜的熒光酯酶底物,能夠通過(guò)被動(dòng)擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)菌的質(zhì)膜,并將活細(xì)菌染成綠色。相反,碘化丙錠只能滲透受損的細(xì)菌膜,將死細(xì)菌標(biāo)記為紅色熒光。因此,通過(guò)適當(dāng)混合MycoLight™ 520和碘化丙錠染料,具有完整細(xì)胞膜的活細(xì)菌發(fā)出綠色熒光,并使用標(biāo)準(zhǔn)熒光素濾光片進(jìn)行分析,而受損細(xì)胞膜的死細(xì)菌發(fā)出紅色熒光,并使用標(biāo)準(zhǔn)TRITC濾光片進(jìn)行分析。
                                                               
                                                              圖3.用MycoLight 熒光活/死細(xì)菌成像試劑盒染色活的和死的枯草芽孢桿菌的混合群體。 具有活性細(xì)胞內(nèi)酯酶的活細(xì)菌顯示綠色熒光,而70%酒精殺死的細(xì)胞膜受損的死細(xì)胞則顯示紅色熒光。
                                                               
                                                              表二.MycoLight熒光活/死細(xì)菌成像試劑盒
                                                              產(chǎn)品名稱(chēng) 探針 Ex/Em(nm) Em顏色 規(guī)格 貨號(hào)
                                                              MycoLight熒光活/死細(xì)菌成像試劑盒 MycoLight520
                                                              碘化丙錠
                                                              488/530
                                                              537/618
                                                              綠色(活)
                                                              紅色(死)
                                                              100Tests 22789
                                                               
                                                              Live or Dead流式細(xì)胞術(shù)固定分析
                                                              能夠區(qū)分和排除死細(xì)胞的能力,實(shí)現(xiàn)了對(duì)細(xì)胞群體的清晰分離和鑒定,這大大提高了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性,消除了各種試劑與死細(xì)胞的非特異性結(jié)合所引起的不良偽影和假陽(yáng)性。為了從流式細(xì)胞儀讀數(shù)中區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞群體,AAT Bioquest提供了多種Live or Dead可固定性死細(xì)胞染色試劑盒。標(biāo)記穩(wěn)定、高效,并且與固定劑和滲透緩沖液兼容,從而可以進(jìn)一步分析細(xì)胞內(nèi)靶標(biāo)。
                                                               
                                                              Live or Dead固定化死細(xì)胞標(biāo)記試劑盒
                                                              使用無(wú)法穿透細(xì)胞膜的胺基反應(yīng)性染料,在流式細(xì)胞儀中區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。每個(gè)試劑盒提供的染料可以輕松滲透受損的死細(xì)胞膜,并共價(jià)結(jié)合到細(xì)胞內(nèi)外的含有胺基的蛋白質(zhì)上,產(chǎn)生強(qiáng)烈的熒光信號(hào)。而在活細(xì)胞上,熒光信號(hào)微弱,因?yàn)榧?xì)胞表面的胺基僅可與染料反應(yīng)�;罴�(xì)胞和死細(xì)胞群體之間信號(hào)強(qiáng)度的差異明顯,因此很容易將死細(xì)胞排除在分析之外。使用Live or Dead固定化死細(xì)胞標(biāo)記試劑盒的標(biāo)記的細(xì)胞可以被固定、滲透化處理,并用于細(xì)胞內(nèi)免疫表型分析或其他多參數(shù)染色實(shí)驗(yàn)。AAT Bioquest提供多種Live or Dead固定化死細(xì)胞標(biāo)記試劑盒,設(shè)計(jì)用于有效激發(fā)主要的激發(fā)源,包括350、405、488、532、561、633和647 nm激光線(xiàn),并在常見(jiàn)通道發(fā)射。這些試劑盒是保存特定細(xì)胞的熒光圖像的優(yōu)秀工具,也可用于熒光顯微鏡演示。
                                                               
                                                              表三.用于流式細(xì)胞術(shù)的Live or Dead固定化死細(xì)胞標(biāo)記試劑盒
                                                              產(chǎn)品名稱(chēng) 激光(nm) Ex/Em(nm) 規(guī)格 貨號(hào)
                                                              Live or Dead固定化死細(xì)胞標(biāo)記試劑盒 綠色熒光 藍(lán)色488 498/521 200Tests 22601
                                                              Live or Dead固定化死細(xì)胞標(biāo)記試劑盒 紅色熒光,適用于流式細(xì)胞儀 藍(lán)/綠488/532 523/617 200Tests 22599
                                                              Live or Dead固定化死細(xì)胞標(biāo)記試劑盒 橙色熒光 綠/黃532/561 547/573 200Tests 22602
                                                              Live or Dead固定化死細(xì)胞標(biāo)記試劑盒 深紅色熒光 紅635 649/660 200Tests 22604
                                                              Live or Dead固定化死細(xì)胞標(biāo)記試劑盒 NIR熒光 紅635 749/775 200Tests 22605
                                                              Live or Dead固定化死細(xì)胞標(biāo)記試劑盒 藍(lán)色熒光 紫350 353/442 200Tests 22600
                                                              Live or Dead固定化死細(xì)胞標(biāo)記試劑盒 藍(lán)色熒光 紫405 410/450 200Tests 22500
                                                              Live or Dead固定化死細(xì)胞標(biāo)記試劑盒 綠色熒光 紫405 408/512 200Tests 22501
                                                              Live or Dead固定化死細(xì)胞標(biāo)記試劑盒 橙色熒光 紫405 398/550 200Tests 22502
                                                              Live or Dead固定化死細(xì)胞標(biāo)記試劑盒 紅色熒光 黃561 583/603 200Tests 22603
                                                              發(fā)布者:西安百螢生物科技有限公司
                                                              聯(lián)系電話(huà):029-68064558
                                                              E-mail:[email protected]

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