蛋白標(biāo)記定量(Protein Labeling Quantification)是一種用于分析蛋白質(zhì)表達(dá)和調(diào)控的實(shí)驗(yàn)技術(shù),蛋白質(zhì)在實(shí)驗(yàn)中會與特定的標(biāo)記分子結(jié)合,旨在量化分析特定蛋白質(zhì)或多個(gè)蛋白質(zhì)在不同樣品中的表達(dá)水平。
蛋白標(biāo)記定量的關(guān)鍵步驟通常包括:
1、蛋白質(zhì)提。
首先從研究的生物樣本(如細(xì)胞、組織或體液)中提取蛋白質(zhì)。
2、蛋白質(zhì)標(biāo)記:
將蛋白質(zhì)與化學(xué)標(biāo)簽或同位素標(biāo)簽結(jié)合。這些標(biāo)簽可以是穩(wěn)定同位素標(biāo)記(如SILAC)、同位素標(biāo)記的氨基酸(如iTRAQ)或其他特定的化學(xué)標(biāo)記物。這些標(biāo)記允許研究人員在后續(xù)分析中區(qū)分和量化不同樣本中的相同蛋白質(zhì)。
圖1. 使用SILAC進(jìn)行蛋白質(zhì)定量(Esthelle et al.,2019)
3、蛋白質(zhì)分離與鑒定:
通過液相色譜(LC)、二維凝膠電泳(2D-PAGE)等技術(shù)將蛋白質(zhì)分離。之后,通常使用質(zhì)譜(MS)技術(shù)對標(biāo)記的蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定和定量。
4、數(shù)據(jù)分析:
利用生物信息學(xué)工具對獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,比較不同樣本或處理?xiàng)l件下的蛋白質(zhì)表達(dá)差異。
圖2. SIALC與Dimethyl標(biāo)記法對比
蛋白標(biāo)記定量服務(wù)在生物醫(yī)學(xué)研究、藥物開發(fā)、疾病診斷等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用,特別是在研究蛋白質(zhì)如何在不同條件下表達(dá)和調(diào)控方面。通過定量分析蛋白質(zhì)的表達(dá),研究人員可以更好地了解疾病的機(jī)理,發(fā)現(xiàn)潛在的生物標(biāo)記物,或評估藥物的效果。