在生物藥物領(lǐng)域，精確測定多肽藥物的分子量對于藥物的質(zhì)量控制和效力評估至關(guān)重要。傳統(tǒng)的分子量測定方法通常需要使用標記劑或熒光染料等進行標記，然而這些標記物可能會對樣品的性質(zhì)產(chǎn)生影響。而無標記(label free)技術(shù)作為一種新興的方法，實現(xiàn)了在無需標記劑的情況下高分辨、準確地測定多肽藥物的分子量。本文將詳細介紹無標記技術(shù)以及其在多肽藥物高分辨分子量測定中的應(yīng)用。

一、無標記技術(shù)簡介

無標記技術(shù)（Label-free techniques）是一類用于分析生物分子的方法，它們不依賴于傳統(tǒng)的標記劑或熒光染料等進行樣品標記。無標記技術(shù)通過測量生物分子的某些特性，如質(zhì)量、形態(tài)、電荷狀態(tài)、折射率等，來實現(xiàn)定量和定性分析。這些技術(shù)具有簡化實驗步驟、減少樣品處理和干預(yù)的優(yōu)勢，因此在生物醫(yī)學(xué)研究和藥物開發(fā)中得到廣泛應(yīng)用。

以下是幾種常見的無標記技術(shù)：

1.質(zhì)譜技術(shù)（Mass Spectrometry，MS）：質(zhì)譜技術(shù)是一種基于離子質(zhì)量和質(zhì)荷比的分析方法，可以用于無標記的定量和定性分析。通過質(zhì)譜儀測量樣品中離子的質(zhì)荷比，可以確定生物分子的質(zhì)量、序列和修飾等信息。質(zhì)譜技術(shù)廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)和藥物代謝動力學(xué)等領(lǐng)域。

圖1

2.表面等離子共振（Surface Plasmon Resonance，SPR）：SPR技術(shù)基于金屬表面等離子共振的原理，通過監(jiān)測生物分子與金屬表面的相互作用引起的光信號變化來定量分析生物分子的相互作用和親和性。SPR技術(shù)廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)相互作用、藥物篩選和生物傳感等領(lǐng)域。

3.生物傳感器技術(shù)：生物傳感器技術(shù)利用生物分子與特定的生物識別元件（如抗體、DNA探針等）之間的相互作用，通過監(jiān)測生物分子與生物識別元件結(jié)合引起的信號變化來實現(xiàn)定量分析。常見的無標記生物傳感器技術(shù)包括電化學(xué)傳感器、光學(xué)傳感器和電子傳感器等。

4.壓電傳感技術(shù)：壓電傳感技術(shù)是一種基于壓電效應(yīng)的無標記分析技術(shù)。通過將生物分子與壓電材料相互作用，引起壓電材料的機械變形，從而產(chǎn)生電信號。壓電傳感技術(shù)可用于生物分子的定量檢測和細胞活性分析。

二、無標記技術(shù)在多肽藥物高分辨分子量測定中的應(yīng)用

1.高分辨分子量測定：

無標記技術(shù)通過質(zhì)譜儀的高分辨能力，可以準確測定多肽藥物的分子量。通過測量多肽藥物的質(zhì)荷比（m/z），結(jié)合高分辨質(zhì)譜儀的分離能力，可以實現(xiàn)對多肽藥物分子量的高分辨測定，包括不同異構(gòu)體和修飾狀態(tài)的區(qū)分。

圖2

2.結(jié)構(gòu)分析和修飾鑒定：

無標記技術(shù)可通過質(zhì)譜分析，揭示多肽藥物的結(jié)構(gòu)特征和修飾情況。通過測量碎片離子的質(zhì)荷比，可以確定多肽的氨基酸序列和修飾位點，進而推斷多肽藥物的結(jié)構(gòu)和功能。

3.定量分析：

無標記技術(shù)通過質(zhì)譜信號的強度或峰面積，可以進行多肽藥物的定量分析。無標記技術(shù)對于測定不同樣品中多肽藥物的豐度差異具有較高的靈敏度和準確性，可以用于藥物代謝動力學(xué)、藥效學(xué)研究以及生物標志物的定量分析。

4.質(zhì)量控制和一致性評估：

無標記技術(shù)可以用于多肽藥物的質(zhì)量控制和一致性評估。通過測定多個批次樣品中多肽藥物的分子量差異，可以評估不同樣品之間的一致性和質(zhì)量穩(wěn)定性。

無標記技術(shù)作為一種無需使用標記劑的新興技術(shù)，在多肽藥物高分辨分子量測定中展現(xiàn)出巨大的潛力。通過解放數(shù)據(jù)的方式，無標記技術(shù)實現(xiàn)了對多肽藥物的高分辨、準確測定，為生物藥物領(lǐng)域帶來了新的突破和發(fā)展。