巨噬細胞介紹以及M1/M2極化實驗操作步驟
瀏覽次數(shù):2596 發(fā)布日期:2023-10-24
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巨噬細胞是一類位于外周血、炎癥組織中的白細胞,屬于免疫細胞中單核細胞類群,主要通過吞噬細菌、死亡細胞或細胞殘片參與非特異性免疫調(diào)節(jié),巨噬細胞將信號傳遞給其他淋巴細胞及其他免疫細胞參與特異性免疫調(diào)調(diào)節(jié)。
巨噬細胞進入血液中以單核細胞前體形式存在,當(dāng)單核細胞浸潤到組織中,會分化成巨噬細胞,巨噬細胞主要存在于淋巴結(jié)、肺泡壁、骨髓、肝臟以及脾臟等組織中。巨噬細胞根據(jù)功能以及炎癥分泌水平分為M1型和M2型巨噬細胞兩種亞群。M1巨噬細胞主要由LPS及IFNγ激活,分泌IFN-γ、TNF-α等促炎癥因子;M2巨噬細胞主要由IL4、IL13、M-CSF等激活,主要分泌IL10等抗炎癥因子。
巨噬細胞的通常鑒定方式為流式細胞術(shù)或者免疫熒光實驗,一般是通過一些巨噬細胞標(biāo)志物進行的,常見的人和小鼠M1巨噬細胞標(biāo)志物有CD68、CD80、CD86、CD32等;常見人和小鼠M2巨噬細胞標(biāo)志物有CD206、CD204、CD163等。
這2種亞群的作用:①作為抗原提呈細胞;②殺傷腫瘤效應(yīng)細胞;③巨噬細胞殺傷腫瘤細胞的機制;④活化的巨噬細胞與腫瘤細胞結(jié)合后,通過釋放溶解細胞酶直接殺傷腫瘤細胞;⑤處理和呈遞腫瘤抗原,激活T細胞以產(chǎn)生特異性抗腫瘤細胞免疫應(yīng)答;⑥巨噬細胞表面上有FC受體,可通過特異性抗體介導(dǎo)ADCC效應(yīng)殺傷腫瘤細胞;⑦活化的巨噬細胞可分泌腫瘤壞死因子(TNF)等細胞毒性因子和產(chǎn)生超氧化代謝產(chǎn)物間接殺傷腫瘤細胞。
基礎(chǔ)科學(xué)實驗中使用的細胞巨噬細胞模型種類很多,來源不同種屬不同需要的誘導(dǎo)因子的時長和濃度均不相同,后續(xù)的機制也有所差異;常使用細胞有小鼠RAW264.7巨噬細胞、人THP1單核細胞、小鼠BMDM骨髓細胞等;一般巨噬細胞研究主要使用人種屬細胞系或者小鼠細胞系。而動物實驗研究巨噬細胞的造模更多是偏向于炎癥模型,例如急性肺損傷模型。下列給大家簡單介紹。
(1)THP-1(人單核細胞)
THP-1是來自急性單核細胞白血病患者血液分離而來,在基礎(chǔ)科研實驗中,常常誘導(dǎo)分化為巨噬細胞來進行機制研究;THP-1通常受PMA(佛波酯)150nmol/L誘導(dǎo)24h即可分化為巨噬細胞,然后在PMA持續(xù)存在的情況下,LPS(100ng/ml)、IFNγ(20ng/ml)誘導(dǎo)48h,產(chǎn)生M1巨噬細胞;IL4(20ng/ml)、IL13(20ng/ml)誘導(dǎo)48h,產(chǎn)生M2巨噬細胞;
(2)RAW264.7細胞(小鼠單核巨噬細胞)
RAW264.7細胞是主要炎癥模型、巨噬細胞極化等體外研究細胞,廣泛用于急性肺損傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等模型中;LPS(200ng/ml),12h可以誘導(dǎo)此細胞向M1分化,產(chǎn)生炎癥因子,10ng/ml IL-4誘導(dǎo)RAW264.7細胞12h可以產(chǎn)生M2細胞。