凝膠過(guò)濾色譜法能從無(wú)蛋白質(zhì)的溶液中去除80%以上的內(nèi)毒素活性。
超濾類似于血透,是用一種相對(duì)分子質(zhì)量大約為10000的膜,通常所用的水是超純水,整個(gè)操作系統(tǒng)使用的儀器均為沒(méi)有內(nèi)毒素污染的無(wú)菌設(shè)備。另外,在這種條件下內(nèi)毒素主要以聚集物的形式存在,所以更加安全可靠。但是需要注意的是,雖然這是一個(gè)緩慢的過(guò)程,然在溫度較高(~100℃)或酸性環(huán)境下(pH3.5~4.5)時(shí),部分內(nèi)毒素分子被分解,從而使內(nèi)毒素分子的實(shí)際毒性部分脂質(zhì)A(相對(duì)分子質(zhì)量2000~4000)大量釋放出來(lái),給內(nèi)毒素的去除帶來(lái)麻煩。
超濾法也可將內(nèi)毒素從相對(duì)分子質(zhì)量小的產(chǎn)物溶液中去除,如葡萄糖、鹽、許多化學(xué)物和不能透過(guò)射線的物質(zhì)以及大多數(shù)抗生素等。相對(duì)分子質(zhì)量為10000的膜也可用于此,產(chǎn)物通過(guò)膜彌散的同時(shí)內(nèi)毒素卻被膜扣留。為了使蛋白質(zhì)產(chǎn)物也能順利彌散出來(lái),膜的孔徑必須大于相對(duì)分子質(zhì)量100000的蛋白質(zhì)的直徑。在蛋白質(zhì)存在的情況下,內(nèi)毒素聚合物分離而成為較小的單體,正如在EDTA或膽酸存在的情況下一樣,內(nèi)毒素單體和蛋白質(zhì)在大小上相接近,兩者均能通過(guò)超濾膜。
1998年,Li和Luo找到了一個(gè)提高蛋白質(zhì)分離度的方法,他們?cè)诤?5mmol/L血紅蛋白和5mol/ml內(nèi)毒素的溶液中加入45mmol/L的Ca2+以改變內(nèi)毒素溶液的結(jié)構(gòu),使之成為大的聚合體從而減少內(nèi)毒素量至6ng/L。用相對(duì)分子質(zhì)量為300000的超濾膜可以使血紅蛋白透過(guò)。但是這種方法對(duì)于那些溶解度受高Ca2+濃度影響小的蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō),使用價(jià)值有限。