端粒相對(duì)長(zhǎng)度檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(定量PCR法)
【產(chǎn)品規(guī)格】
1.TL50 50*3 Reaction
2.TL100 100*3 Reaction
【產(chǎn)品說(shuō)明】
【產(chǎn)品說(shuō)明】
端粒（Telomeres）：是真核生物線性染色體末端的非編碼串聯(lián)重復(fù)性(TTAGGG)n陣列，端粒長(zhǎng)度
的變化，與衰老、癌癥、或神經(jīng)退行性等多種疾病相關(guān)。定量PCR法是檢測(cè)端粒長(zhǎng)度的經(jīng)典技術(shù)，用時(shí)短，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，適用于批量樣本檢測(cè)。
本產(chǎn)品試劑盒采用雙色熒光 qPCR（SYBRgreen+VIC）檢測(cè)端粒相對(duì)長(zhǎng)度，檢測(cè)對(duì)象為血液、口腔
拭子或細(xì)胞DNA。該試劑盒具有以下特點(diǎn)：
1.穩(wěn)定：全程閉管操作，無(wú)交叉污染。
2.可靠：端粒與內(nèi)參單管檢測(cè)，減少孔間干擾。
內(nèi)參基因?yàn)槎嗫截�，與端粒量差降低。
3.方便：操作簡(jiǎn)單，無(wú)需電泳步驟。
4.定量：△CT 值，可定量檢測(cè)端粒相對(duì)長(zhǎng)度。
【運(yùn)輸及保存條件】
低溫冷凍運(yùn)輸， -20℃保存，有效期 1 年，凍融以后，4℃保存，有效期4周。
【產(chǎn)品組分】
注：本試劑盒提供試劑，使用前請(qǐng)上下輕柔顛倒十次混勻，后低速離心、小心開啟。避免起泡。
注：本試劑盒提供試劑，使用前請(qǐng)上下輕柔顛倒十次混勻，后低速離心、小心開啟。避免起泡。
【操作步驟】
1. 樣品質(zhì)控
使用商業(yè)化DNA抽提試劑盒提取血液、細(xì)胞或組織DNA，DNA純度A260/A280≈1.8，檢測(cè)樣品濃度標(biāo)化為15~20ng/µL，上樣4µL。
注：標(biāo)準(zhǔn)品濃度已標(biāo)化為15~20ng/µL，上樣4µL。樣品及標(biāo)準(zhǔn)品濃度過高或過低會(huì)影響擴(kuò)增效率，對(duì)實(shí)驗(yàn)造成干擾，測(cè)量結(jié)果誤差較大。
2. qPCR反應(yīng)體系及條件
反應(yīng)體系以20µL為例PCR儀設(shè)置以 ABI 7500為例，其他型號(hào)定量PCR儀應(yīng)通過標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行參數(shù)校正或咨詢專業(yè)技術(shù)人員。
【基線設(shè)置】
內(nèi)參基線設(shè)定：以標(biāo)準(zhǔn)品基線設(shè)定內(nèi)參基線，將內(nèi)參的基線設(shè)定為6~12個(gè)循環(huán)。
端粒基線設(shè)定：以標(biāo)準(zhǔn)品基線設(shè)定端�；�，將端粒的基線設(shè)定為3~7個(gè)循環(huán)。
【閾值設(shè)置】
內(nèi)參閾值設(shè)定：以標(biāo)準(zhǔn)品CT值設(shè)定內(nèi)參擴(kuò)增曲線閾值，將內(nèi)參的CT 值定為17±1。
端粒閾值設(shè)定：以標(biāo)準(zhǔn)品CT值設(shè)定端粒擴(kuò)增曲線閾值，將端粒的CT 值定為12±1 。
說(shuō)明：
（1）如果標(biāo)準(zhǔn)品的內(nèi)參CT值>25，但陰性對(duì)照管的內(nèi)參CT值正常， 表明試劑盒擴(kuò)增效率下降或
儀器運(yùn)行障礙。
（2）如果陰性對(duì)照管的內(nèi)參或端粒CT＜25，表明在環(huán)境或加樣過程中存在輕微污染。
備注：
1. 樣本檢測(cè)以及標(biāo)準(zhǔn)品的使用應(yīng)做技術(shù)上三重復(fù)，陰性對(duì)照做單重復(fù)。
2. 如果檢測(cè)樣本為血液DNA，可以將所得端粒相對(duì)長(zhǎng)度在上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司構(gòu)建
的1500例中國(guó)人群數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，評(píng)估樣本個(gè)體端粒的相對(duì)長(zhǎng)度；若選用其他樣本，建議自行構(gòu)
建數(shù)據(jù)庫(kù)并做進(jìn)一步分析。
3. 端粒長(zhǎng)度計(jì)算方法（T/S）：先分別計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品與樣品的△CT=CT（端粒）-CT（內(nèi)參）
再計(jì)算 T/S=2-(△CT(樣品)-△CT（標(biāo)準(zhǔn)品）)
注：T為待測(cè)樣品，S為標(biāo)準(zhǔn)品，T/S為待測(cè)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的端粒相對(duì)長(zhǎng)度比
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