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                                                              English | 中文版 | 手機版 企業(yè)登錄 | 個人登錄 | 郵件訂閱
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                                                              SDS凝膠電泳常用試劑配制

                                                              瀏覽次數(shù):8445 發(fā)布日期:2023-6-13  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負
                                                              SDS凝膠電泳常用試劑配制方法如下:

                                                              一、3×SDS-PAGE loading buffer的配制

                                                              3×SDS-PAGE loading buffer 10ml
                                                              1M Tris-Hcl (PH 6.8) 1.5ml
                                                              SDS 0.6g
                                                              BPB(溴酚藍) 30mg
                                                              甘油(丙三醇) 3ml
                                                              去離子水 5.5ml

                                                              1、將除BPB以外的藥品溶解。SDS常溫下很難溶解,可以在37℃水浴溶解。溶解后,再加入BPB,進行溶解;

                                                              2、把溶好的buffer分裝到1.5ml的離心管中,1ml/管,常溫放置;

                                                              3、使用前,每管加入30µL巰基乙醇。

                                                              注意事項:巰基乙醇為危險品,加入的過程在通風(fēng)櫥中完成,并且?guī)Ш檬痔住?br />
                                                              二、10×PBS的配制

                                                              0.1M PBS(10×PBS) 1L
                                                              NaH2PO4.2H2O 2.83g
                                                              Nacl 85g
                                                              Na2HPO4.12H2O 28.98g

                                                              1、用去離子水將以上藥品進行溶解;(溶解的非常慢,可能需要過夜)

                                                              2、調(diào)PH值到7.2,用0.4µm的濾膜過濾。常溫保存;

                                                              3、工作時用的是1×PBS。

                                                              三、1.5M Tris-Hcl (PH 8.8) 的配制

                                                              1.5M Tris-Hcl 250ml
                                                              Tris 45.425g

                                                              1、用200ml去離子水將Tris溶解。

                                                              2、用濃鹽酸調(diào)PH值到8.8。

                                                              3、調(diào)好PH的Tris-Hcl定容到250ml。

                                                              4、0.4µm的濾膜過濾,常溫保存。

                                                              注意事項:Tris的緩沖能力很強,調(diào)PH值時,費些時間,但不要調(diào)過。

                                                              四、1M Tris-Hcl (PH 6.8) 的配制

                                                              1M Tris-Hcl 250ml
                                                              Tris 30.275g

                                                              1、用200ml去離子水將Tris溶解;

                                                              2、用濃鹽酸調(diào)PH值到6.8;

                                                              3、調(diào)好PH的Tris-Hcl定容到250ml;

                                                              4、0.4µm的濾膜過濾,常溫保存。

                                                              五、30%丙烯酰胺的配制

                                                              30%丙烯酰胺 250ml
                                                              丙烯酰胺 72.5 ml
                                                              BIS甲叉丙烯酰胺 2.5 ml

                                                              1、把藥品用去離子水溶解后定容到250ml;

                                                              2、用濾紙過濾,放在棕色瓶子中,4℃保存。

                                                              注意事項:兩種藥品有毒性,配制過程要帶手套和口罩。

                                                              六、10%SDS的配制

                                                              1.1g SDS加入10ml去離子水進行溶解;

                                                              2.分裝到1.5ml離心管中,-20℃保存。

                                                              七、10%過硫酸銨的配制

                                                              1.1g 過硫酸銨加入10ml去離子水進行溶解。

                                                              2.分裝到1.5ml離心管中,-20℃保存。

                                                              八、5×SDS-PAGE電泳緩沖液的配制

                                                              5×SDS-PAGE電泳緩沖液 1L
                                                              Tris 15.1g
                                                              Glycine(甘氨酸) 94g
                                                              SDS 5g

                                                              將以上藥品用去離子水溶解后定容到1L,常溫保存。工作時用的是1×SDS-PAGE電泳緩沖液。

                                                              九、考馬斯亮藍R-250染色液的配制

                                                              1、往1g考馬斯亮藍R-250中加入250ml異丙醇,在磁力攪拌器上攪拌六小時以上;

                                                              2、加入650ml去離子水,磁力攪拌器攪拌過夜;

                                                              3、再加入100ml冰醋酸進行溶解,磁力攪拌器攪拌;

                                                              4、在通風(fēng)櫥內(nèi)用濾紙進行過濾。常溫保存。染色液只能反復(fù)用兩次。

                                                              注意事項:在磁力攪拌器上攪拌時,要把容器封口。

                                                              十、脫色液的配制

                                                              脫色液 1L
                                                              醋酸(冰乙酸) 100ml
                                                              乙醇(無水乙醇) 50ml
                                                              去離子水 850ml

                                                              常溫保存。
                                                              來源:蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
                                                              聯(lián)系電話:0512-62956104
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