RAW 264.7細胞培養(yǎng)攻略及常見問題解決方案
RAW 264.7細胞源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤；在正常培養(yǎng)中，細胞會出現(xiàn)多邊形和不規(guī)則形狀，并伴有許多偽足的生成，細胞貼壁能力超強。 RAW 264.7細胞屬免疫細胞，有多種功能，是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對象。呈不規(guī)則形，貼壁；細胞生長速度快，2-3天即可傳一代；營養(yǎng)體系是DMEM+10%FBS。
表1 RAW 264.7細胞基本信息
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名稱 |
RAW 264.7（小鼠單核巨噬細胞白血病細胞） |
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形態(tài) |
不規(guī)則形 |
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生長特性 |
貼壁；細胞生長速度快，2-3天即可傳一代 |
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營養(yǎng)體系 |
DMEM+10%FBS+1%PS |
圖1 RAW 264.7（小鼠單核巨噬細胞白血病細胞）
首先我們討論的第一大問題是胰酶消化對RAW264.7細胞的刺激分化。如圖2所示：被胰酶消化過的RAW 264.7細胞表現(xiàn)出明顯的分化現(xiàn)象呈多角形，有較長觸角。
圖2 分化的RAW 264.7（小鼠單核巨噬細胞白血病細胞）
圖2 分化的RAW 264.7（小鼠單核巨噬細胞白血病細胞）
如何避免細胞傳代因胰酶而受刺激分化，刮取是比較合適的方法。把細胞培養(yǎng)液倒掉，加入37℃遇溫的PBS，然后刮細胞，食指和拇指夾緊細胞刮，細胞刮橡膠頭刮面切面與平皿平行，用腕力輕輕刮（注意用腕力刮，不要用臂力），切記只能刮一次，不要來回刮和反復(fù)刮，吹打的力度一定要輕，切勿暴力吹打。
接下來我們討論的第二種情況是為啥RAW 264.7換了血清批次后聚團嚴(yán)重？如圖3所示：換血清批次后嚴(yán)重聚團的RAW 264.7細胞，呈片狀分部，片層之間間隔明顯。
圖3 更換血清批次后嚴(yán)重聚團的RAW 264.7（小鼠單核巨噬細胞白血病細胞）
圖3 更換血清批次后嚴(yán)重聚團的RAW 264.7（小鼠單核巨噬細胞白血病細胞）
如果您剛好也碰到這種情況，那不妨來了解一下血清批間差：血清來源于動物，其組成成分有1000種左右，且血清組成及含量常隨供血動物的年齡、生理條件和營養(yǎng)條件而異。每個批號的組分百分比含量都是不固定的，所以批間差異是存在的。RAW 264.7細胞本身有聚團生長特性，但嚴(yán)重聚團可能受到血清里的某些因子刺激。
怎樣預(yù)防血清批間差導(dǎo)致的細胞聚團呢？先用血清試用裝，試用效果好，可購買和血清試用裝批次相同的正裝，囤積半年或一年的用量，有效避免批間差對細胞的影響（胎牛血清在-20℃保存可達5年）。
最后咱們討論的第三大問題是有分化的細胞說明細胞狀態(tài)不好嗎？如圖4所示，細胞群中有個別細胞出現(xiàn)觸角。
圖4 個別分化的RAW 264.7（小鼠單核巨噬細胞白血病細胞）
值得一提的是培養(yǎng)時，無法保證100% 不分化，通過傳代可以將分化比例控制在一定范圍。RAW264.7細胞生長速度快，2-3天即可傳一代， 傳代時間間隔超過3天更容易分化，很難吹下，每一次接種密度都要控制好。推薦傳代比例為1：3—1：6；推薦傳代時間：2—3天；推薦傳代融合率：80%-90%
看了這么多長觸角的細胞，我們來看看“馬相”還不錯的RAW 264.7細胞吧。如圖5和圖6所示，生長良好的RAW 即使融合度達到很高仍不分化，胞體邊界感清晰，各個喂得圓鼓鼓、胖嘟嘟的，時刻準(zhǔn)備著為人類生命科學(xué)研究而“獻身”。
圖5和圖6 長勢良好的RAW 264.7（小鼠單核巨噬細胞白血病細胞）
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