首先我們要知道,濁度法又叫比濁法,是一種用鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中的濁度變化而測定內(nèi)毒素含量的方法。那濁度法到底是怎么利用鱟試劑進行內(nèi)毒素檢測的呢?
首先需要將鱟試劑與反應(yīng)混合物進行配比,通過與細(xì)菌內(nèi)毒素的作用反應(yīng)后,試管內(nèi)部會產(chǎn)生堅硬的凝膠,而凝膠則會將液體變得渾濁起來,這時候根據(jù)鱟試劑和細(xì)菌內(nèi)毒素的反應(yīng)可以知道,在內(nèi)毒素濃度在20~100pg的條件下,試管的濁度程度是和細(xì)菌內(nèi)毒素呈線性關(guān)系的。根據(jù)這個試驗可以知道,濁度法在試驗中可以大大減少鱟試劑的使用量,而且整個操作過程是非?焖佟⒏咝У,整個試驗操作過程也非常便捷,因為儀器的半自動化,試驗人員可以非常容易上手。
在這個試驗過程中,整個過程必須把握精準(zhǔn)度,對鱟試劑的稀釋比例一定要了解清楚,樣品也要小心翼翼處理,避免進一步污染,然后各取0.1ml加入微孔板中,放入震顫儀中振動60秒鐘,這個過程能充分將鱟試劑和樣品充分均勻混合。接著在37攝氏度放入環(huán)境下靜置一小時,然后使用使用光度計在360~380nm處讀取試驗樣品的光密度值。這里還需將稀釋過的細(xì)菌內(nèi)毒素的一系列批次進行陽性對照,然后將光密度值和細(xì)菌內(nèi)毒素的含量繪制呈標(biāo)準(zhǔn)曲線,這樣就能準(zhǔn)確知道試驗樣品的細(xì)菌內(nèi)毒素含量。
整個操作過程,時間的把控是非常重要的,時間越長,濁度變化越明顯,正常情況下,靜置一小時即可。假如是在室溫的情況下,如果靜置長時間的話,試驗樣品的濁度程度也會有所增強,所以靜置結(jié)束后,一定要馬上讀取該試驗樣品的光密度值,而且還應(yīng)該每分鐘讀取一次,重復(fù)四次進行,再選取它們的平均值,這樣細(xì)菌內(nèi)毒素的含量才能準(zhǔn)備,但是要知道這里的變異系數(shù)是不能超過1%的。
以上就是濁度法利用鱟試劑進行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測的方法,大家在檢測時一定要把握好細(xì)節(jié),試驗結(jié)果才能更準(zhǔn)確。