Trizol法提取總RNA的流程及原理
提取原理：Trizol試劑的主要成分是苯/酚。苯/酚的主要作用是對細胞進行裂解，從而使細胞當(dāng)中的蛋白質(zhì)以及核酸物質(zhì)解聚而得以釋放。苯/酚雖然可以有效的使蛋白質(zhì)變性，但它不能完全抑制RNA酶的活性，因此Trizol中還加入了8－羥基喹/啉、異硫氰酸胍、β-巰基乙醇等來抑制內(nèi)源和外源RNase（即RNA酶）。
Trizol試劑是直接從細胞或組織中提取總RNA的試劑。在樣品的裂解液或勻漿中，Trizol能保持RNA的完整性。加入氯/仿(CHCl3)后離心，樣品能分成水樣層和有機層。而RNA存在于水樣層中。在收集上面的水樣層后，RNA可以通過異丙醇沉淀的方法來還原。在除去水樣層之后，樣品中的核酸和蛋白也能相繼以沉淀的形式還原。乙醇沉淀能析出中間層的DNA，在有機層中加入異丙醇能析出有機層的蛋白。
Trizol試劑不但可用于小量樣品（組織：50-100mg；細胞：5×106），也可用于大量樣品（組織≥1g或細胞≥107），對動物、植物、細菌、血液提取都適用，可同時處理大量不同樣品。反應(yīng)迅速，提取的總RNA沒有DNA和蛋白質(zhì)污染，可用于Northernblot、RT-PCR、RNase保護分析等。
RNA純化要求：
1.純化后不應(yīng)存在對酶（如逆轉(zhuǎn)錄酶）有抑制作用的物質(zhì)。
2.排除有機溶劑和金屬離子的污染。
3.蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子等的污染降到最低程度。
4.排除DNA分子的污染。
RNA提取的注意事項：
1.杜絕外源酶的污染。
（1）嚴格戴好口罩，手套。
（2）實驗涉及的離心管，Tip頭，移液器桿，電泳槽，實驗臺面等要徹底處理。
（3）實驗所涉及的試劑/溶液，尤其是水，必須確保RNase-Free。
2.阻止內(nèi)源酶的活性。
（1）選擇合適的勻漿方法。
（2）選擇合適的裂解液。
（3）控制好樣品的起始量。
Trizol試劑是直接從細胞或組織中提取總RNA的試劑。在樣品的裂解液或勻漿中，Trizol能保持RNA的完整性。加入氯/仿(CHCl3)后離心，樣品能分成水樣層和有機層。而RNA存在于水樣層中。在收集上面的水樣層后，RNA可以通過異丙醇沉淀的方法來還原。在除去水樣層之后，樣品中的核酸和蛋白也能相繼以沉淀的形式還原。乙醇沉淀能析出中間層的DNA，在有機層中加入異丙醇能析出有機層的蛋白。
Trizol試劑不但可用于小量樣品（組織：50-100mg；細胞：5×106），也可用于大量樣品（組織≥1g或細胞≥107），對動物、植物、細菌、血液提取都適用，可同時處理大量不同樣品。反應(yīng)迅速，提取的總RNA沒有DNA和蛋白質(zhì)污染，可用于Northernblot、RT-PCR、RNase保護分析等。
RNA純化要求：
1.純化后不應(yīng)存在對酶（如逆轉(zhuǎn)錄酶）有抑制作用的物質(zhì)。
2.排除有機溶劑和金屬離子的污染。
3.蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子等的污染降到最低程度。
4.排除DNA分子的污染。
RNA提取的注意事項：
1.杜絕外源酶的污染。
（1）嚴格戴好口罩，手套。
（2）實驗涉及的離心管，Tip頭，移液器桿，電泳槽，實驗臺面等要徹底處理。
（3）實驗所涉及的試劑/溶液，尤其是水，必須確保RNase-Free。
2.阻止內(nèi)源酶的活性。
（1）選擇合適的勻漿方法。
（2）選擇合適的裂解液。
（3）控制好樣品的起始量。
標簽：
Trizol
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