利用紫外法測定鮭魚精DNA熔解溫度（Tm）
蟬鳴聲聲入夏來，烈日高照，暑氣炎炎，歡迎來到一年一度的人間大火爐時(shí)節(jié)——夏季。夏天，我們享受著天然免費(fèi)的汗蒸和干蒸，不僅大腦熱到顫抖，連DNA都要化了，離變異也不遠(yuǎn)了。
DNA 的變性的特點(diǎn)是爆發(fā)式的, 變性作用發(fā)生在一個(gè)很窄的范圍。通常把DNA 的雙螺旋結(jié)構(gòu)失去一半時(shí)的溫度稱為該DNA 的熔點(diǎn)或熔解溫度( melting temperature ) , 用Tm 表示。DNA 的Tm 值一般在70～85 ℃之間。DNA的變性從開始解鏈到完全解鏈，是在一個(gè)相當(dāng)小的溫度范圍內(nèi)完成的，一系列物化性質(zhì)也發(fā)生改變: 260 nm 區(qū)紫外吸收值增高(增色效應(yīng)) , 粘度降低, 浮力密度降低等。所以，我們可以利用紫外可見分光光度計(jì)檢測DNA樣品在260nm處吸光度隨溫度的變化，對解鏈過程進(jìn)行監(jiān)測。
在以下示例實(shí)驗(yàn)中，使用梅特勒-托利多紫外可見分光光度計(jì)UV7配備酷T（CuveT）恒溫器，測定20℃-95℃升溫范圍內(nèi)鮭魚精DNA在260nm處的吸光度變化，以監(jiān)測其變性過程。我們用各溫度點(diǎn)測得的吸光度繪制圖譜，可得到一條溫度-吸光度S形曲線，如下圖所示：
DNA 的變性的特點(diǎn)是爆發(fā)式的, 變性作用發(fā)生在一個(gè)很窄的范圍。通常把DNA 的雙螺旋結(jié)構(gòu)失去一半時(shí)的溫度稱為該DNA 的熔點(diǎn)或熔解溫度( melting temperature ) , 用Tm 表示。DNA 的Tm 值一般在70～85 ℃之間。DNA的變性從開始解鏈到完全解鏈，是在一個(gè)相當(dāng)小的溫度范圍內(nèi)完成的，一系列物化性質(zhì)也發(fā)生改變: 260 nm 區(qū)紫外吸收值增高(增色效應(yīng)) , 粘度降低, 浮力密度降低等。所以，我們可以利用紫外可見分光光度計(jì)檢測DNA樣品在260nm處吸光度隨溫度的變化，對解鏈過程進(jìn)行監(jiān)測。
在以下示例實(shí)驗(yàn)中，使用梅特勒-托利多紫外可見分光光度計(jì)UV7配備酷T（CuveT）恒溫器，測定20℃-95℃升溫范圍內(nèi)鮭魚精DNA在260nm處的吸光度變化，以監(jiān)測其變性過程。我們用各溫度點(diǎn)測得的吸光度繪制圖譜，可得到一條溫度-吸光度S形曲線，如下圖所示：
圖：260nm處鮭魚精DNA的熔解曲線（案例來源梅特勒公眾號）
在此實(shí)驗(yàn)案例中，鮭魚精DNA的Tm值通過確定S形曲線的拐點(diǎn)來確定。經(jīng)測定和計(jì)算，鮭魚精DNA的Tm值為64.4℃，說明其G≡C堿基對的濃度相對較低。確定熔解溫度的另外一種方法是用切線法對S形曲線的拐點(diǎn)進(jìn)行圖形化評估。
我司已為廣大相信光的實(shí)驗(yàn)奧特曼準(zhǔn)備好了應(yīng)用秘笈和成套裝備，輕松應(yīng)對需要對樣品進(jìn)行溫控的紫外實(shí)驗(yàn)。梅特勒-托利多超越系列紫外可見分光光度計(jì)可搭載酷T帕爾貼控溫系統(tǒng)或勞達(dá)（LAUDA）等水浴恒溫系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)對樣品精準(zhǔn)快速的溫度控制：
梅特勒-托利多紫外可見分光光度計(jì)+酷T帕爾貼控溫系統(tǒng)方案：
梅特勒-托利多紫外可見分光光度計(jì)+勞達(dá)（LAUDA）水浴溫控系統(tǒng)聯(lián)用方案：
來源：東南科儀
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