典型的生長曲線即可分為潛伏期、指數(shù)生長期、平頂期及退化衰老四個部分，其中的三個不同生長時期（潛伏期、指數(shù)生長期和平頂期）是每個細胞系所共有的特征。通過測定生長曲線,不僅可以了解培養(yǎng)細胞生物學特性的基本參數(shù)、測定細胞絕對生長數(shù)、判斷細胞活力，而且也可用于測定藥物等外來因素對細胞生長的影響。本實驗采用計數(shù)法測定細胞生長曲線，通過連續(xù)對細胞計數(shù)（通常為10天，一般應每次計數(shù)3孔細胞取平均值），然后以存活細胞數(shù)對培養(yǎng)時間作圖，即得該種細胞的生長曲線。
 

2.實驗材料

①小鼠胚胎成纖維細胞或雞胚成纖維細胞,DMEM完全培養(yǎng)基。

②24孔板細胞培養(yǎng)板、吸管、吸球，超凈工作臺、倒置顯微鏡、細胞計數(shù)板。

①取生長狀態(tài)良好的小鼠胎兒成纖維細胞或雞胚成纖維細胞,用胰酶消化。

②用DMEM制備成細胞懸液。細胞計數(shù)后，將細胞濃度調整為(1~5)×104個/mL，精確地將細胞分別接種于兩塊24孔板中，要求每孔加入的細胞總數(shù)一致，加入的培養(yǎng)液量要一致。

③每天取3孔細胞消化，進行細胞計數(shù)，計算平均值。一般需連續(xù)計數(shù)10天左右。從培養(yǎng)起開始，每3天需給未計數(shù)的細胞換液。

④以培養(yǎng)時間為橫軸，細胞濃度為縱軸，將每天所得的細胞濃度標在坐標紙上，各點連線即得細胞生長曲線。

4.注意事項

① 細胞接種濃度不能過多也不能過少，在合適的濃度下細胞在7~10天內能長滿而不發(fā)生生長抑制；細胞數(shù)量太少，細胞適應期太長；數(shù)量太多，細胞將很快進入增值穩(wěn)定期，在一段時間內需進行傳代，曲線不能準確反映細胞生長情況。同種細胞的生長曲線先后測定要采用同一接種密度，這樣才能做縱向比較；不同的細胞也要接種細胞數(shù)相同，才能進行比較。

② 細胞生長曲線是觀察細胞生長基本規(guī)律的重要方法。只有具備自身穩(wěn)定性生長特性的細胞才適合在觀察細胞生長變化的實驗中應用。因而在細胞系細胞和非建系細胞生長特性觀察中，生長曲線的測定是最為基本的指標。

③ 細胞生長曲線雖然最為常用，但有時其反映數(shù)值不夠精確，有20% ~ 30%的誤差，需結合其他指標進行分析。在生長曲線上細胞數(shù)量增加1倍時間稱為細胞倍增時間，可以從曲線上換算出。細胞倍增的時間區(qū)間即為細胞對數(shù)生長期，細胞傳代、冷凍等實驗多應在此區(qū)間進行。

④ 細胞在不同培養(yǎng)液中的細胞生長曲線和細胞倍增時間可以直接反映細胞在該種培養(yǎng)液內的增殖速度，是對培養(yǎng)液進行選擇的主要依據(jù)。通過個同培養(yǎng)液內細胞生長曲線的差異，篩選出對成纖維細胞和上皮細胞最適合的培養(yǎng)液。

⑤通過對細胞生長曲線的繪制，可比較不同的培養(yǎng)液對細胞生長曲線變化的影響。在條件允許的情況下，分析培養(yǎng)液中添加不同的生物活性物質（如生長因子、激素等）對細胞生長的影響，從而篩選出合適的細胞培養(yǎng)液。

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公 司 簡 介
 

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