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小鼠避暗實(shí)驗(yàn)的三種訓(xùn)練方法

瀏覽次數(shù):1396 發(fā)布日期:2022-5-14  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
避暗實(shí)驗(yàn)具有方法簡便、指標(biāo)明確、便于觀察等優(yōu)點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于學(xué)習(xí)和記憶的研究。然而,以往的實(shí)驗(yàn)即使模型成功、藥效滿意亦常出現(xiàn)處理組間差異過小的情況,不利于統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。影響避暗實(shí)驗(yàn)的主、客觀因素很多,如不嚴(yán)格控制則實(shí)驗(yàn)結(jié)果往往缺乏可靠性,筆者在研究工作中發(fā)現(xiàn)不同的訓(xùn)練方法對(duì)結(jié)果影響較大,而相關(guān)研究尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在通過觀察小鼠避暗實(shí)驗(yàn)不同訓(xùn)練方法對(duì)氯胺酮遺忘模型測試效果的影響,為訓(xùn)練方法的選擇提供參考依據(jù)。

避暗儀分為明、暗兩室,其間有一直徑為3cm的圓洞,兩室底部均鋪以銅柵。暗室底部銅柵可通電,電壓通過按鈕調(diào)節(jié),一般為40V,50Hz。實(shí)驗(yàn)分為訓(xùn)練和測試兩部分,訓(xùn)練時(shí)暗室底部銅柵通電。

訓(xùn)練

①M(fèi)OS法:訓(xùn)練在一天內(nèi)完成,先將小鼠放入避暗儀中適應(yīng)環(huán)境3 min,訓(xùn)練時(shí)將小鼠背對(duì)洞口放入明室內(nèi),其進(jìn)入暗室受到電擊即取出;

②MOL法:訓(xùn)練在一天內(nèi)完成,小鼠適應(yīng)環(huán)境3min,訓(xùn)練3min;

③MUL法:連續(xù)3天在同一時(shí)間將小鼠放入避暗儀中適應(yīng)3min,第三天適應(yīng)完成后開始訓(xùn)練,3min后取出。適應(yīng)環(huán)境和訓(xùn)練時(shí)任小鼠在明室和暗室之間自由穿梭,步入潛伏期大于3min者棄去不用。

測試

訓(xùn)練完成24h后將小鼠再次放入明室,記錄其第一次進(jìn)入暗室所需的時(shí)間,即步入潛伏期(step through latency, STL)和5min內(nèi)進(jìn)入暗室的次數(shù),即錯(cuò)誤次數(shù)(error times, ETs)。若5min內(nèi)小鼠未進(jìn)入暗室則STL記為300s,ETs記為0。
 

避暗實(shí)驗(yàn)依鼠類的嗜暗習(xí)性而設(shè)計(jì),小鼠受電擊而減少向暗室移動(dòng)的行為,屬于被動(dòng)回避性條件反射。這種暗環(huán)境被動(dòng)回避可表現(xiàn)出小鼠受電擊后不敢進(jìn)入暗室而下一次避暗過程再次進(jìn)入的特點(diǎn),即應(yīng)激刺激的學(xué)習(xí)性和遺忘性,而應(yīng)激對(duì)小鼠記憶亦有損害作用。

在實(shí)驗(yàn)中觀察到剛放入明室的小鼠會(huì)出現(xiàn)洗臉、舔毛等刻板動(dòng)作,可能是陌生環(huán)境刺激所致,這種刺激有增強(qiáng)小鼠應(yīng)激反應(yīng)從而影響訓(xùn)練效果的可能。研究表明,小鼠對(duì)新環(huán)境的記憶比回避反應(yīng)更易消退,訓(xùn)練時(shí)的應(yīng)激狀態(tài)可能使適應(yīng)失去作用,測試過程小鼠受陌生環(huán)境的刺激,影響記憶的再現(xiàn)。

綜上所述,小鼠對(duì)環(huán)境的適應(yīng)程度可能在較大程度上影響了避暗實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,多次適應(yīng)限時(shí)訓(xùn)練是相對(duì)合適的訓(xùn)練方法。

附錄

SuperPAS避暗實(shí)驗(yàn)軟件廣泛用于學(xué)習(xí)記憶功能、認(rèn)知神經(jīng)科學(xué)、神經(jīng)生理學(xué)、神經(jīng)藥理學(xué)、認(rèn)知功能退行性變性等實(shí)驗(yàn)研究方面的研究,簡單易操作,容易判別結(jié)果,可信度高,既可單獨(dú)作為檢測實(shí)驗(yàn)提供課題參數(shù),也可以作為其他學(xué)習(xí)記憶和認(rèn)知功能實(shí)驗(yàn)的輔助或預(yù)篩選實(shí)驗(yàn)。

測試指標(biāo)
  1. 觀察時(shí)間:動(dòng)物完成所有測試所花費(fèi)的實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
  2. 總路程:動(dòng)物在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中的運(yùn)行路程,可初步反映動(dòng)物的活動(dòng)量大小。
  3. 潛伏期:動(dòng)物首次進(jìn)入暗箱并被電擊的時(shí)間,潛伏期越長,反映動(dòng)物記憶越好。
  4. 錯(cuò)誤次數(shù):整個(gè)實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi),動(dòng)物總共進(jìn)入暗箱并被電擊的次數(shù)。
  5. 明箱逗留時(shí)間:動(dòng)物在明箱停留的總時(shí)間。
  6. 暗箱逗留時(shí)間:動(dòng)物在暗箱停留的總時(shí)間。
  7. 明箱活動(dòng)路程、暗箱活動(dòng)路程
  8. 明箱逗留時(shí)間比、暗箱逗留時(shí)間比
系統(tǒng)構(gòu)成
  1. 通用避暗實(shí)驗(yàn)箱:含攝像頭、照明裝置(燈光亮度可調(diào));
  2. 大小鼠組件:糞便清理盒、電柵欄;
  3. 視頻采集卡:USB高清定制;
  4. SuperShocker動(dòng)物行為學(xué)主控器:控制加電、燈光、揚(yáng)聲器;
  5. 視頻線;電源線;軟件安裝U盤;加密狗;
  6. 畫面合成器1臺(tái)(選配)
  7. 通用隔音箱:含貓眼裝置、夾層吸音棉
如果您也對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)感興趣,歡迎關(guān)注和推薦關(guān)注知乎帳號(hào):腦聲常談微信公眾號(hào):bioviewer(動(dòng)物神經(jīng)科學(xué)與行為學(xué)),專注于動(dòng)物神經(jīng)科學(xué)與行為學(xué)的實(shí)驗(yàn)知識(shí)的方法傳播與分享交流,您可以推薦給您身邊的朋友、同學(xué)以及老師,我們會(huì)定期更新您需要的相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法的視頻和文章,希望能對(duì)大家?guī)韼椭?/span>
 
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