人源化CD3單抗助力T細胞藥物的開發(fā)與應用
CD3是一種多聚體蛋白復合物，由四條不同的肽鏈組成：ε、γ、δ和ζ。這些不同肽鏈組裝形成二聚體（εγ, εδ, ζζ）并發(fā)揮功能。CD3復合物作為T細胞共受體，與T細胞受體（TCR）以非共價方式結(jié)合，形成TCR-CD3復合體（Smith-Garvin等人，2009）。CD3蛋白復合物是T細胞譜系的標志性分子，因此抗CD3抗體廣泛地應用于T細胞標記。
CD3蛋白結(jié)構(gòu)和功能
TCR-CD3復合體在胸腺細胞的成熟和T細胞活化中發(fā)揮著重要作用。TCR本身不能結(jié)合游離的抗原肽，其只能識別主要組織相容性抗原（MHC）分子提呈的抗原。TCR由異源二聚體構(gòu)成，如TCRα和TCRβ。TCR與MHC提呈的抗原相結(jié)合后，導致T細胞的活化。不過，由于TCR的胞內(nèi)區(qū)蛋白質(zhì)序列較短，缺乏信號傳導所需結(jié)構(gòu)域，不能傳遞活化信號，因此需要由CD3蛋白復合物啟動細胞內(nèi)信號傳導。
CD3蛋白亞基由胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)組成。其胞內(nèi)區(qū)含有免疫受體酪氨酸激活基序（ITAM），是TCR信號通路活化的關鍵結(jié)構(gòu)域。CD3ε、γ和δ亞基的胞內(nèi)含有一個ITAM結(jié)構(gòu)域，而CD3ζ亞基的細胞質(zhì)區(qū)域包含三個ITAM結(jié)構(gòu)域。因此，一個TCR-CD3復合體含有十個ITAM結(jié)構(gòu)域，使得該復合體對抗原提呈信號非常敏感。
MHC-抗原/TCR相結(jié)合后，CD3多肽鏈胞內(nèi)ITAM結(jié)構(gòu)域中保守的酪氨酸基序被蛋白酪氨酸激酶磷酸化，進而招募ZAP70。反過來，Zap70磷酸化TCR信號級聯(lián)反應中的其他蛋白質(zhì)，最終導致T細胞活化。根據(jù)T細胞活化的雙信號理論，上述抗原特異性信號是第一信號。CD28、ICSO和CD40L等共刺激分子與其配體相互作用提供第二信號。雙信號同時存在才能導致T細胞的完全活化。
TCR-CD3復合體
CD3抗體的應用
CD3抗體是第一個在臨床上應用的單抗藥物，用于降低器官移植病人急性排斥反應的免疫抑制劑。CD3抗體治療器官排斥反應主要是通過4種機制：（1）“包被”作用（Coating），CD3抗體結(jié)合CD3蛋白后，包被（Coating）在T細胞表面，阻斷了T細胞與抗原提呈細胞或其他免疫細胞的相互作用，達到抑制免疫反應發(fā)生的目的；（2）清除T細胞。CD3抗體進入體內(nèi)后，可以通過補體依賴或抗體介導的細胞毒作用導致T細胞的死亡；（3）TCR表面表達下調(diào)。CD3抗體結(jié)合CD3蛋白后，導致TCR胞外區(qū)脫落或內(nèi)化，提高了T細胞活化的閾值，致使T細胞不能充分應答抗原提呈作用；（4）CD3信號傳導。CD3抗體結(jié)合不同免疫細胞的CD3蛋白后產(chǎn)生不同的信號轉(zhuǎn)導效應，結(jié)合致病性T細胞會誘導其凋亡，而結(jié)合調(diào)節(jié)性T細胞則導致其擴增，綜合效應是引起機體免疫抑制。
近年來，CD3雙特異性抗體（CD3-bispecific antibodies，CD3-BsAbs）是癌癥免疫治療領域的一種新興治療方式。CD3 BsAbs通過同時結(jié)合腫瘤細胞上表達的腫瘤相關抗原和T細胞上的CD3發(fā)揮作用。CD3-BSAb將這兩種細胞類型交聯(lián)，可以形成免疫突觸，類似于天然T細胞受體（TCR）/肽-主要組織相容性復合體（MHC）復合體。這種突觸導致T細胞活化，從而分泌炎癥細胞因子和細胞溶解性分子，從而殺死腫瘤細胞。CD3 BsAbs的優(yōu)勢在于，無論TCR的特異性如何，任何T細胞都可以作為效應細胞。對于這些BsAbs，TCR信號不需要TCR的抗原結(jié)合域參與，而是通過CD3啟動。因此，CD3 BSAb可以利用所有可用的T細胞，并且不限于腫瘤特異性T細胞，這點與免疫檢查點治療的要求不同，也是其一大優(yōu)勢。
不過，CD3抗體的應用因其明顯的副作用也受到了阻礙，例如它的免疫原性和有絲分裂潛能。人源化抗體改造是降低抗體免疫原性的有效手段。北京同立海源生物作為國內(nèi)專注基因/細胞治療GMP級上游原料生產(chǎn)企業(yè)，獨具技術優(yōu)勢的哺乳動物細胞表達平臺，自主研發(fā)了人源化的CD3抗體，可以用于抗體標記、T細胞的體外活化和免疫系統(tǒng)人源化小鼠T細胞清除等科學研究。人源化抗體因其低免疫原性，將為實驗數(shù)據(jù)的認可性和后續(xù)的成果轉(zhuǎn)化提供強大保證。
優(yōu)勢介紹：
人源化改造及細胞制備
北京同立海源生物采用基因重組方法，將原有CD3 單克隆抗體（克隆OKT3）做人源化改造，在保持了OKT3單抗對T細胞激活能力的前提下，最大程度上消除了鼠源性抗體的免疫原性，在此基礎上利用CHO細胞表達人源化改造的后抗體能更好地應用于臨床細胞藥物的研發(fā)，在腫瘤殺傷方面發(fā)揮著重要作用。相對于其他采用雜交瘤技術制備的CD3單克隆抗體，生產(chǎn)過程中使用完全化學界定無血清培養(yǎng)基，真正做到無血清、無動物源、無任何外源因子，完全避免了傳統(tǒng)雜交瘤技術生產(chǎn)的CD3單克隆抗體對細胞培養(yǎng)可能產(chǎn)生的不利影響，大大提高了產(chǎn)品的穩(wěn)定性、安全性
高安全性
安全是細胞培養(yǎng)的首要條件。CD3單克隆抗體的內(nèi)毒素水平直接影響到后期所收獲免疫細胞的內(nèi)毒素含量。由于免疫細胞制品對內(nèi)毒素具有嚴格的要求，一般內(nèi)毒素水平必須控制在5EU的水平。北京同立海源生物采用人源細胞進行CD3單克隆抗體的生產(chǎn)，整個生產(chǎn)環(huán)節(jié)均在GMP環(huán)境中完成，無動物源性、無外源因子，無內(nèi)毒素風險，純化及貯存過程加以嚴格的內(nèi)毒素控制，所有批次產(chǎn)品嚴格控制內(nèi)毒素含量不高于0.1 EU/μg，完全滿足免疫細胞制備的要求。
高純度
抗體純化受到抗體的生產(chǎn)體系、初始純度、親合分離介質(zhì)質(zhì)量、純化方案、儲存方案等諸多條件的影響。為了獲得高質(zhì)量的CD3單克隆抗體，北京同立海源生物采用自主研發(fā)生產(chǎn)的親和分離介質(zhì)，并對抗體結(jié)合、洗脫條件進行不斷優(yōu)化，保證每個批次的CD3單克隆抗體經(jīng)HPLC檢測純度達99%。
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CD3單抗純度檢測：
高活性、高穩(wěn)定性
流式細胞術可用于檢測CD3抗體與Jurkat細胞（人外周血白血病T細胞）表面CD3 的結(jié)合活性，從而評估CD3抗體的生物學活性。實驗結(jié)果表明，北京同立海源生物的CD3抗體在低濃度100-300ng/mL時即可與Jurkat細胞有很好的結(jié)合活性。較好的細胞因子活性能更好的刺激T細胞的增殖。
批次穩(wěn)定性高，現(xiàn)貨供應
北京同立海源生物配備GE公司生物反應器，擁有大規(guī)模細胞培養(yǎng)表達能力，能夠?qū)崿F(xiàn)CD3單克隆抗體的大量制備，滿足您隨時的訂購需求。產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定、批間差異小，對基礎研究以及臨床級免疫細胞制備均有較好的應用前景。
CD3是免疫細胞藥物開發(fā)中的核心原料，北京同立海源生物十余年專注細胞與基因治療（CGT）上游核心試劑原料的研發(fā)生產(chǎn)。擁有哺乳動物細胞表達蛋白質(zhì)工程平臺，采用基因重組方法，將原有CD3單克隆抗體（克隆OKT3）做人源化改造，在保持了OKT3單抗對T細胞激活能力的前提下，最大程度上消除了鼠源性抗體的免疫原性，在腫瘤殺傷方面發(fā)揮著重要作用。
在細胞和基因治療領域，北京同立海源生物自主開發(fā)的人源化CD3單抗（貨號:GMP-TL101），已支持多家客戶的T細胞藥物申報IND。
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