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配制培養(yǎng)基具體過程

瀏覽次數(shù):541 發(fā)布日期:2021-11-15  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
培養(yǎng)基是供微生物生長(zhǎng)、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。由于微生物具有不同的營(yíng)養(yǎng)類型,對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同,加之實(shí)驗(yàn)和研究的目的不同,所以培養(yǎng)基的種類很多,使用的原料也各有差異,但從營(yíng)養(yǎng)角度分析,培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)素以及水分等。另外,培養(yǎng)基還應(yīng)具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。
瓊脂是從石花菜等海藻中提取的膠體物質(zhì),是應(yīng)用最廣的凝固劑。加瓊脂制成的培養(yǎng)基98~100℃下融化,于45℃以下凝固。但多次反復(fù)融化,其凝固性降低。任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應(yīng)及時(shí)徹底滅菌,以備純培養(yǎng)用。一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。

1.未開封的干粉培養(yǎng)基保質(zhì)較長(zhǎng),已開封的保質(zhì)期會(huì)變短。在瓶體上注明開封日期,用后擰緊瓶蓋。個(gè)別品種易變質(zhì),如SC增菌液,可冷藏保存。

2.若干粉培養(yǎng)基結(jié)塊或顏色發(fā)生改變,不得使用。

3.配制用水可用蒸餾水、去離子水等,電阻率不小于30萬(wàn)Ω•cm,每批應(yīng)檢查一次。

4.稱量干粉培養(yǎng)基時(shí)為避免污染,可用專用角匙。

5.自行配制的培養(yǎng)基,各營(yíng)養(yǎng)成分應(yīng)按要求順序加入,避免產(chǎn)生沉淀。

6.盛放培養(yǎng)基的容器不宜用銅或鐵鍋,以防其離子混入培養(yǎng)基影響微生物生長(zhǎng)。

7.稱量好的干粉培養(yǎng)基應(yīng)先溶解再高壓滅菌。

8.自行配制的培養(yǎng)基應(yīng)完全溶解后再調(diào)PH。PH值須冷后測(cè)定,因培養(yǎng)基所含成分不同,對(duì)冷的和熱的進(jìn)行測(cè)定,其PH值相差很多。培養(yǎng)基的PH值須精確測(cè)定,否則會(huì)影響微生物的生長(zhǎng)和反應(yīng)地觀察。另外,PH值不可反復(fù)調(diào)試,否則會(huì)影響培養(yǎng)基的滲透壓。

9.需要加熱煮沸的培養(yǎng)基應(yīng)避免溢出,應(yīng)邊攪拌邊加熱。燒糊的培養(yǎng)基,其成分已改變,不得使用,應(yīng)重配。

10.不須高壓滅菌的培養(yǎng)基,配制用水及盛放的容器可于配制前先進(jìn)行高壓滅菌。

11.配制好的培養(yǎng)基一般采用高壓滅菌,且應(yīng)立即滅菌,以防微生物生長(zhǎng)消耗養(yǎng)分而改變培養(yǎng)基成分。

12.壓力蒸汽滅菌器應(yīng)定期檢定,平時(shí)可用生物指示菌法和化學(xué)變色紙片進(jìn)行滅菌驗(yàn)證。滅菌時(shí)應(yīng)注意排除冷空氣。含糖或特殊培養(yǎng)基應(yīng)按要求選好滅菌溫度及時(shí)間。

13.滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)迅速冷卻到所須溫度,避免長(zhǎng)時(shí)間保存在滅菌鍋中,造成過度滅菌,影響培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分或選擇性效果。

14.配制的培養(yǎng)基的量應(yīng)恰當(dāng),未用完的可注明配制日期,并且應(yīng)該在最長(zhǎng)保值期內(nèi)用完。配好的培養(yǎng)基應(yīng)避光、冷藏保存防止蒸發(fā)。

15.凡受污染長(zhǎng)過細(xì)菌的培養(yǎng)基,不得滅菌再用。

16.三(雙)糖鐵瓊脂斜面試管塞不宜塞的過緊,否則容易影響斜面堿性反應(yīng);LST如果試管塞過緊,影響排氣,可導(dǎo)致滅菌后小倒管內(nèi)仍有氣泡。

17.需要加添加劑或抗生素的培養(yǎng)基應(yīng)即配即用。

18.固體培養(yǎng)基如儲(chǔ)存太久,使用前應(yīng)再加熱一次,使其表面濕潤(rùn)以利細(xì)菌生長(zhǎng)。
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