在實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進行測定，證試劑盒溫度要和室溫一致。如果把試劑盒從冰箱拿出來直接做實驗會造成一些弱陽性標本的檢測出現(xiàn)假陰性。因為在后面的孵育反應(yīng)步驟中，造成孵育時間不夠。其次，ELISA實驗中洗板用的洗液需每日更換配制，稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。
ELISA測定中試劑預備：
1. 標準品的稀釋和運用：在運用前2小時內(nèi)預備。將凍干品管內(nèi)參加1ml樣品稀釋液，徹底溶解后做倍比稀釋。不稀釋后的標準品在2小時內(nèi)運用。
2．生物素符號抗體工作液：在運用前2小時內(nèi)預備。
1）．依據(jù)每孔需求0.1ml核算總的用量（實踐制造時應(yīng)多制造0.1-0.2ml）。
2）．按10ul生物素符號抗體稀釋液990ul的份額制造工作液。悄悄混勻。
3．親和素-過氧化物酶復合物（ABC）工作液的預備：在運用前1小時內(nèi)預備。
1）．依據(jù)每孔需求0.1ml核算總的用量（實配時應(yīng)多制造0.1-0.2ml）。
2）．按10ul親和素-過氧化物酶復合物（ABC）加ABC稀釋液990ul的份額制造工作液。悄悄混勻。
4. TMB顯色工作液的預備：在運用之前30分鐘，按TMB顯色液A 9份加 TMB顯色液B 1份的份額制造TMB顯色工作液。

血清樣本使用微量加樣槍加樣。使用微量加樣槍加樣必須注意避免以下幾點:
1)、加樣太快，無法保證微量加樣的準確性和均一性。需勻速加樣，吸樣時，加樣槍需按到第一檔，加樣時，加樣槍需直接按到底。
2)、加樣應(yīng)直接加入反應(yīng)孔底部，加在反應(yīng)孔孔壁上易濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。盡量避免出現(xiàn)氣泡。
3)、反應(yīng)試劑的加入時先要注意試劑的有效期，再注意滴加的角度和滴加的速度。滴加太快易出現(xiàn)重復滴加或加在兩孔之間。