眾所周知，細(xì)胞培養(yǎng)中最常見(jiàn)的組合就是基礎(chǔ)培養(yǎng)基+血清了。隨著科研的深入，無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)運(yùn)而生，它添加了血清的主要成分：粘附因子、生長(zhǎng)因子、必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和激素等，能減少血清帶來(lái)的不利因素，使細(xì)胞培養(yǎng)的條件更穩(wěn)定。然而在細(xì)胞培養(yǎng)中，常常被大家所忽視的細(xì)胞培養(yǎng)輔助試劑也發(fā)揮著舉足輕重的作用。今天小編就帶您來(lái)探索一下細(xì)胞培養(yǎng)的秘密花園——細(xì)胞培養(yǎng)輔助試劑。 ❤ 胰酶的作用原理是什么呢？
胰酶是一種蛋白酶，酶切位點(diǎn)是肽鏈的Lys或Arg兩個(gè)殘基的羧基端肽鏈，通過(guò)在特定位置上降解蛋白，使細(xì)胞膜上和培養(yǎng)皿結(jié)合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時(shí)細(xì)胞在自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力的作用下成為球形。

❤ 使用胰酶時(shí)需注意哪些細(xì)節(jié)問(wèn)題？
在使用胰酶（Trypsins）細(xì)胞消化液的過(guò)程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差，做流式時(shí)的CD Marker也可能會(huì)下降。胰酶進(jìn)行分裝時(shí)盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因?yàn)槔鋬霰４鏁r(shí)液體體積會(huì)膨脹，多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會(huì)降低消化效果并可能造成污染。胰酶適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細(xì)胞，如胚胎、上皮、肝、腎等組織，但對(duì)于纖維性組織和較硬的癌組織效果較差。胰酶消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。
注意：不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才表示消化好了。
一般肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動(dòng)了，多半呈沙狀移動(dòng)就可以了，這時(shí)就應(yīng)該停止消化。

❤ 如何選擇正確的細(xì)胞消化試劑？
BI提供動(dòng)物來(lái)源的傳統(tǒng)胰酶及基因工程生產(chǎn)的重組胰蛋白酶。
動(dòng)物胰酶普遍用于血清培養(yǎng)，不同的細(xì)胞加入胰酶的成分和濃度不一樣。貼壁不牢和半貼壁細(xì)胞盡量使用濃度0.05%不含EDTA的胰酶且不需要放在培養(yǎng)箱孵育，這樣易于控制，對(duì)細(xì)胞的傷害也降到最低。對(duì)于難消化的細(xì)胞就需要使用含EDTA的0.25%的胰酶，而不是無(wú)限地延長(zhǎng)消化時(shí)間。重組胰酶用于無(wú)血清培養(yǎng)。重組胰酶具有與動(dòng)物源性胰蛋白酶相同的酶學(xué)性質(zhì)，但是不含任何動(dòng)物源成分，可替代胰蛋白酶使用（常用于細(xì)胞治療）。

❤ EDTA和胰蛋白酶各有什么作用呢？
許多人不用胰蛋白酶，只用EDTA，或者用胰蛋白酶/EDTA聯(lián)合作用。胰酶切割ECM（負(fù)責(zé)粘連和附著的蛋白），而EDTA通過(guò)螯合Ca²⁺，抑制Integrin的貼壁活性，所以EDTA的作用更加溫和。

胰酶篇-BI產(chǎn)品推薦

                                                           普通胰酶：

                                                           特殊胰酶：

                                                溫馨提示：重組胰酶室溫保存即可噢~

❤ 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，抗生素是否是必要的添加物？
答案是否定的，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)不應(yīng)常規(guī)使用抗生素，因?yàn)檫B續(xù)使用抗生素會(huì)促進(jìn)抗生素耐藥性細(xì)胞株的產(chǎn)生，導(dǎo)致輕度污染持續(xù)存在。一旦將抗生素從培養(yǎng)基中去除，這種輕度污染最終將發(fā)展成大規(guī)模污染，而且連續(xù)使用抗生素還會(huì)掩蓋支原體感染及其他隱性污染。另外，有些抗生素會(huì)與細(xì)胞發(fā)生交叉反應(yīng)，影響細(xì)胞生化，并可能改變培養(yǎng)細(xì)胞的分化潛能，干擾研究過(guò)程。抗生素只能作為對(duì)付污染的最后手段而且只能短期使用，并應(yīng)盡快撤除。如果長(zhǎng)期使用抗生素，則應(yīng)同時(shí)進(jìn)行無(wú)抗生素培養(yǎng)，以便作為鑒別隱性感染的對(duì)照。


❤ 原代細(xì)胞里加雙抗或者三抗，會(huì)不會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)？
分離原代細(xì)胞初期，為了避免造成污染，一般會(huì)建議預(yù)防性加入適量雙抗或者三抗，適量的抗生素用量對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)幾乎沒(méi)有影響，可以在細(xì)胞培養(yǎng)穩(wěn)定后降低或移除抗生素。

❤ 青霉素（Penicillin）、鏈霉素（Streptomycin）的抑菌原理是什么？
青霉素通過(guò)抑制細(xì)菌細(xì)胞壁四肽側(cè)鏈和五肽交連橋的結(jié)合而阻礙細(xì)胞壁合成并發(fā)揮殺菌作用，對(duì)革蘭陽(yáng)性菌有效，但革蘭陰性菌缺乏五肽交連橋，因此青霉素對(duì)其作用不大。鏈霉素作用于細(xì)菌體內(nèi)的核糖體，抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成，對(duì)革蘭陰性菌有效。青鏈雙抗 (Penicillin-Streptomycin Solution, Cat#：03-031-1B)聯(lián)合抑制細(xì)菌，可以有效殺滅G+、G-菌。

❤ 青鏈制真菌素三抗溶液（Penicillin-Streptomycin Nystatin Solution, Cat#：03-032-1B），融解后會(huì)有黃色物質(zhì)析出，屬于正�，F(xiàn)象嗎？
三抗本身是濃縮溶液，制真霉素在高濃度飽和狀態(tài)水溶性差會(huì)被析出呈黃色物質(zhì)，溶液外觀略顯渾濁，屬于正�，F(xiàn)象，可以放心使用。

抗生素篇-BI產(chǎn)品推薦

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❤ 如何解決L-谷氨酰胺不穩(wěn)定的問(wèn)題呢？
1. 選擇不含谷氨酰胺的培養(yǎng)基，自己添加。
2. 選擇穩(wěn)定的谷氨酰胺替代物——L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液。

❤ L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的工作原理是什么？
在含有L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞可逐漸釋放氨肽酶，水解二肽，緩慢釋放L-谷氨酰胺和L-丙氨酸至培養(yǎng)基中。隨后，L-谷氨酰胺和L-丙氨酸可被細(xì)胞吸收，用于蛋白質(zhì)生成或TCA循環(huán)。這好比是流加培養(yǎng)的策略，將L-谷氨酰胺連續(xù)加入培養(yǎng)基中，但是始終維持較低的濃度水平。結(jié)果獲得有效的能量代謝和較高的生長(zhǎng)量，且不會(huì)生成多余的氨。

△ L-谷氨酰胺以一種可控的方式從培養(yǎng)基輸送到細(xì)胞
 

谷氨酰胺篇-BI產(chǎn)品推薦

貨號(hào)	名稱
03-020-1	L-Glutamine Solution (200 mM) 谷氨酰胺
03-022-1	L-Alanyl-L-Glutamine (Stable  Glutamine) (200 mM) 穩(wěn)定型谷氨酰胺

貨號(hào)	產(chǎn)品
05-750-1	人纖維粘連蛋白
41-951-100	轉(zhuǎn)鐵蛋白（不含鐵）
41-952-100	轉(zhuǎn)鐵蛋白（鐵離子飽和）
41-975-100	人類重組胰島素

胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-Selenious Acid（ITS）通過(guò)補(bǔ)充常見(jiàn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，可以大幅度降低細(xì)胞對(duì)胎牛血清的需求。在胎牛血清濃度低于4%的情況下，ITS或ITS-E都能促進(jìn)各種貼壁細(xì)胞的生長(zhǎng)。研究表明，下列所述補(bǔ)充成分能被大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞所利用。它們能促進(jìn)細(xì)胞增殖，降低多種細(xì)胞對(duì)血清的需求。據(jù)文獻(xiàn)資料，細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，當(dāng)ITS或ITS-E與2%-4%的血清一起使用時(shí)，可達(dá)到與添加10%血清相似的增殖效果。

無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)添加物-VivaCell產(chǎn)品推薦

跟著小編探索完細(xì)胞培養(yǎng)秘密花園的您，是不是豁然開(kāi)朗了~

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