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                                                              English | 中文版 | 手機(jī)版 企業(yè)登錄 | 個人登錄 | 郵件訂閱
                                                              當(dāng)前位置 > 首頁 > 技術(shù)文章 > 戊糖片球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒使用步驟

                                                              戊糖片球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒使用步驟

                                                              瀏覽次數(shù):258 發(fā)布日期:2021-5-13  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
                                                              戊糖片球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒使用方法:
                                                              一、樣品DNA的制備
                                                              用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
                                                              二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
                                                              1. 標(biāo)記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
                                                              2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
                                                              3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
                                                              4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
                                                              5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
                                                              6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
                                                              7. NC管中不加任何陽性對照。
                                                              8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
                                                              小鼠免疫球蛋白G2(IgG2)ELISA試劑盒
                                                              小鼠免疫球蛋白G1(IgG1)ELISA試劑盒
                                                              小鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒
                                                              小鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒
                                                              小鼠免疫球蛋白D(IgD)ELISA試劑盒
                                                              小鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒
                                                              小鼠輪狀病毒(RV)抗原(Ag)ELISA試劑盒
                                                              小鼠卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)ELISA試劑盒
                                                              小鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)ELISA試劑盒
                                                              小鼠卵泡抑素(FS)ELISA試劑盒
                                                              小鼠硫氧化還原蛋白(Trx)ELISA試劑盒
                                                              小鼠硫氧還蛋白還原酶(TrxR)ELISA試劑盒
                                                              小鼠磷脂酰絲氨酸(PS)ELISA試劑盒
                                                              小鼠磷脂酰肌醇抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)ELISA試劑盒
                                                              小鼠磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)ELISA試劑盒
                                                              小鼠磷脂酶D2(PLD2)ELISA試劑盒
                                                              小鼠磷脂酶A2(PL-A2)ELISA試劑盒
                                                              小鼠磷脂肌醇3激酶(PI3-K)ELISA試劑盒
                                                              小鼠磷酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒
                                                              發(fā)布者:上海研生實業(yè)有限公司
                                                              聯(lián)系電話:021-59963601
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