2018年,PubMed 中共有194,262 篇蛋白相關(guān)的論文,其中有16,196(8.3%)篇用到了 WB。WB 的使用比例在過去30年中穩(wěn)定在8%到9%左右,而更為現(xiàn)代和準(zhǔn)確的蛋白質(zhì)譜技術(shù)(MS),在過去十年中應(yīng)用比例則穩(wěn)定在4%,僅僅是WB的一半。四十年后的今天,WB依舊是應(yīng)用率最高的蛋白質(zhì)分析技術(shù)。但是重現(xiàn)性和穩(wěn)定性的問題,也使Western Blot技術(shù)處在風(fēng)口浪尖上。因此2014年,美國國立衛(wèi)生研究院提倡提高科研重現(xiàn)性,呼吁研究界、科學(xué)出版商、大學(xué)、工業(yè)界和其他領(lǐng)域推動這一變化。率先響應(yīng)的期刊有Science,Cell,Nature和JBC。那讓我們來看看期刊都有哪些具體要求:
一、不建議跑平行膠,因為平行膠和剝離膜孵育體系,操作條件的不一致,影響定量的準(zhǔn)確性,因此最好內(nèi)參和目的蛋白要在同一張印跡膜上。
二、選擇寬動態(tài)范圍的方法,確認(rèn)信號強(qiáng)度與所上樣量之間的線性關(guān)系,例如用膠片做化學(xué)發(fā)光方法的動態(tài)范圍就很窄,不建議使用。
三、強(qiáng)烈推薦使用總蛋白進(jìn)行歸一化,因為看家蛋白容易受處理條件影響而發(fā)生變化,影響定量的結(jié)果,使用總蛋白定量更真實地反映目標(biāo)蛋白表達(dá)量的變化。
四、提交原始數(shù)據(jù),例如:JBC,PLOS和CELL等雜志都要求要提供原始數(shù)據(jù)。
Azure Sapphire多光譜激光成像系統(tǒng)如何滿足期刊要求
☑ Sapphire是多熒光檢測系統(tǒng),可多達(dá)4個激光光源,同時進(jìn)行4通道熒光檢測,獲得更快的工作流程和更可靠的定量數(shù)據(jù)。
☑ Sapphire配合AzureRed總蛋白熒光染色劑可以做總蛋白歸一化和定量三個靶標(biāo)蛋白,生成可以信賴的定量Western Blotting數(shù)據(jù)。
☑ Sapphire配有獨(dú)特的三種檢測器設(shè)計,最大限度地提高儀器的檢測動態(tài)范圍,保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。☑ Sapphire提供原始數(shù)據(jù)16bit的tiff圖給到期刊,這里的tiff原始數(shù)據(jù)是指未經(jīng)裁剪,像素修改,對比度調(diào)整等任何操作的圖,保證結(jié)果的真實性和可靠性。