2019 年 12 月底，武漢爆發(fā)新型冠狀病毒（2019-nCoV）感染導致的肺炎，2020年1月22日國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布《新型冠狀病毒感染的肺炎實驗室檢測技術(shù)指南（第二版）》中指出實驗活動暫按照病原微生物危害程度分類中第二類病原微生物進行管理，有要求如下：

1、病毒培養(yǎng) 在病毒的分離、培養(yǎng)、滴定、中和試驗、活病毒及其蛋白純化、病毒凍干以及產(chǎn)生活病毒的重組試驗等操作應(yīng)在具有開展相應(yīng)活動資質(zhì)的生物安全三級（Biological Safety Level 3,BSL-3）實驗室進行；

2、動物感染實驗 指以活病毒感染動物的實驗，應(yīng)在具有開展相應(yīng)活動資質(zhì)的動物（Animal）BSL-
3（ABSL-3）實驗室進行操作。

3、未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料的操作 未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料在采用可靠的方法滅活前進行的病毒抗原檢測、血清學檢測、核酸檢測、生化分析等操作，應(yīng)在生物安全二級（BSL-2）實驗室操作，但個人防護裝備參照生物安全三級（BSL-3）實驗室的防護要求。

WHO 和美國 CDC 等也發(fā)布了相關(guān)指南，指導實驗室檢測及臨床診治，指南建議核酸檢測在生物安全第二等級（BSL-2）設(shè)施中進行。

從目前掌握的新型冠狀病毒的生物學性狀、傳播特性、致病性、臨床資料等信息，考慮到新型冠狀病毒感染聚集性發(fā)病且有重癥病例，并有死亡病例的特點，實驗活動暫按照病原微生物危害程度分類中第二類病原微生物進行管理，和口蹄疫、高致病性禽流感病毒、艾滋病毒（I型和II型）、SARS冠狀病毒等大家常見病毒為同一類，這樣就對實驗室生物安全方面提出了挑戰(zhàn)。

本文將從試驗廢棄物處理、試驗設(shè)備和空間消毒滅菌、標本運輸安全等三個方面對潛在風險層面進行分析，以供相關(guān)專業(yè)人士參考。

一、試驗廢棄物
根據(jù)GB19484-2008《實驗室安全通用要求》中規(guī)定，生物安全三級（BSL-3）實驗室在防護區(qū)內(nèi)需設(shè)置生物安全型的雙扉高壓蒸汽滅菌柜，試驗過程中產(chǎn)生的固體廢棄物和少量液體廢物物需經(jīng)過專用的高壓蒸汽滅菌柜滅活后排出。因此，生物安全型的雙扉高壓蒸汽滅菌柜是生物安全三級（BSL-3）實驗室不可或缺的設(shè)備，同時生物安全型的雙扉高壓蒸汽滅菌柜在制造和選型方面有著特殊的要求。

1、生物安全密封方面的要求 生物安全型的雙扉高壓蒸汽滅菌柜橫跨污染區(qū)和非污染區(qū)，這樣就對滅菌柜和墻面的密封提出了較高的要求，正常情況下在裝載側(cè)進行生物安全密封，故在設(shè)備選型過程中需要注意滅菌柜腔體外側(cè)至設(shè)備設(shè)備外側(cè)裝飾板內(nèi)側(cè)從上到下、從左到右需要至少用AISI 304不銹鋼板滿焊。同時在設(shè)備外層裝飾板與墻壁的密封處需要用不銹鋼板進行錨定并用優(yōu)質(zhì)硅膠進行密封。特別要注意的是在設(shè)備與墻壁密封處不用不銹鋼板錨定只是簡單的用硅膠進行密封在長時間運行后因硅膠老化發(fā)生病毒泄漏，造成生物安全事故。如1967德國馬爾堡病毒實驗室感染事件、1979年前蘇聯(lián)斯維爾德洛夫斯克炭疽菌泄漏事件、2003年新加坡國立大學實驗室SARS感染事件、2004中國大陸中國疾病預(yù)防控制中心實驗室SARS感染事件等等。
2、進氣過濾器方面的要求 按照滅菌設(shè)計要求需配置可更換濾芯的不銹鋼外殼的空氣過濾器。過濾后的空氣用于滅菌循環(huán)結(jié)束后平衡腔體內(nèi)外壓力和對門加壓密封，對0.2um過濾器過濾效率至少要到達99.9 % ，同時過濾器需帶有批次在線滅菌功能，建議每年更換1次。
  3、滅廢過濾器 生物安全三級（BSL-3）實驗室裝載側(cè)位于走廊側(cè)門的污染區(qū)，在開門時可能會含有病原微生物的空氣進入高壓蒸汽滅菌柜腔體，同時被滅菌的廢棄物中也會含有病原微生物，在開始滅菌抽真空時腔體內(nèi)的空氣必須經(jīng)過高效過濾器過濾方可排出，高效過濾器在每個滅菌循環(huán)中都應(yīng)該被滅菌，該過濾器建議每年更換1次。




4、進蒸汽的方式 相較與普通的高壓蒸汽滅菌柜而言，生物安全型高壓蒸汽滅菌柜進蒸汽的位置有較大的不同。普通的高壓蒸汽滅菌柜的蒸汽由蒸氣發(fā)生器產(chǎn)生純蒸汽后通過不銹鋼管路從腔體的側(cè)面或頂部分布器在腔體內(nèi)分布，滅菌循環(huán)開始后腔體內(nèi)空氣、空氣蒸汽混合物通過腔體底部的排水口排出，而生物安全型高壓蒸汽滅菌柜的蒸汽則由腔體底部進入腔體，滅菌循環(huán)開始后腔體內(nèi)的空氣、空氣蒸汽混合物通過滅廢過濾器過濾后排出，從而避免開始滅菌抽真空過程中腔體含有致病微生物的空氣、空氣蒸汽混合物被排出實驗室。
5、滅菌冷凝水處理 普通的高壓蒸汽滅菌柜開始滅菌循環(huán)后產(chǎn)生的冷凝水直接通過排水口排入地漏，而生物安全型高壓蒸汽滅菌柜在開始滅菌循環(huán)后產(chǎn)生的冷凝水則是會被收集滅菌，待滅菌完成后才會通過地漏排出。

二、試驗設(shè)備和空間消毒滅菌
生物安全實驗室是通過實驗室設(shè)計建造、實驗設(shè)備的配置、個人防護裝備的使用，通過嚴格遵守預(yù)先制定的安全操作程序(SOP)和管理規(guī)范等綜合措施，確保操作生物危險因子的工作人員不受實驗對象的傷害，確保周圍環(huán)境不受其污染，但往往在實驗室中與各種病原微生物相關(guān)，所以做好安全防護和環(huán)境消毒滅菌是預(yù)防的重要手段。

傳統(tǒng)的方法多采用甲醛熏蒸和紫外燈照射的方法，由于甲醛具有刺激性氣味，而且對眼睛、呼吸道、皮膚具有不良刺激，高濃度溶液可引起皮膚凝固性壞死，為A類致癌物質(zhì)。在甲醛滅菌后需要進行中和，中和后白色會有結(jié)晶物產(chǎn)生，且很難完全清除。紫外燈照射照射方法滅菌因紫外線照射需要直接照射被消毒物體表面或空氣才起作用，而對被遮擋的墻壁表面、地面和工作臺面等則不起作用。隨著大家對環(huán)境和人身安全的關(guān)注，氣化過氧化氫空間滅菌技術(shù)越來越受到設(shè)備使用的喜愛，它是一種將液態(tài)過氧化氫轉(zhuǎn)換成氣態(tài)過氧化氫的滅菌方法，其主要特點是干燥、作用快速、無毒無殘留等優(yōu)越性。

1、滅菌全過程控制 作用原理是將30%~35%濃度液體過氧化氫通過高溫閃蒸板氣化成氣態(tài)過氧化氫，然后輸送到實驗室空間內(nèi)，過氧化氫氣體進行分子無規(guī)則布朗運動對空氣和物體表面進行消毒。該技術(shù)普遍運用于生物安全實驗室。過氧化氫消毒包括準備階段(預(yù)熱除濕)、調(diào)節(jié)階段(過氧化氫氣體快速注入)、滅菌階段(過氧化氫氣體慢速注入以維持其室內(nèi)濃度)、降解通風4個階段。
 

2、閃蒸溫度控制 眾所周知，35%濃度的液體過氧化氫沸點是108℃，傳統(tǒng)的低溫閃蒸技術(shù)無法實現(xiàn)過氧化氫完全氣化，這樣就會在滅菌全過程中有高濃度的過氧化氫液體被噴射到設(shè)備表面、彩鋼板墻面及環(huán)氧地坪處，從而造成腐蝕氣泡，而這些腐蝕氣泡可能會給了氣溶膠傳播這一類致病微生物隱藏空間，無法運行氣化過氧化氫空間滅菌技術(shù)進行完全滅菌，從而導致實驗室發(fā)生感染，比如結(jié)核分枝桿菌。

3、數(shù)據(jù)傳輸 由于生物安全三級（BSL-3）實驗室是密閉的負壓實驗室，無法像普通實驗室一樣進行數(shù)據(jù)的紙質(zhì)數(shù)據(jù)的記錄和直接傳遞，目前多采用實驗數(shù)據(jù)記錄與傳輸?shù)挠嬎銠C網(wǎng)絡(luò)進行數(shù)據(jù)的傳遞，這樣就需要對氣化過氧化氫空間滅菌設(shè)備提出了要求，設(shè)備自身需帶有存儲功能和網(wǎng)絡(luò)端口。

4、對生物安全實驗室環(huán)境保持的影響 生物安全三級（BSL-3）實驗室正常狀態(tài)下是負壓狀態(tài)，實驗室的氣流采用定向流動控制。在氣化過氧化氫空間滅菌設(shè)備運行過程中實驗室內(nèi)溫度、濕度變化均會對實驗室負壓狀態(tài)有一定的影響，故在設(shè)備運行過程中需要監(jiān)控設(shè)備閃蒸板和房間的溫度、房間的濕度都是身份必要的。

5、新型冠狀病毒期間要注意的事宜
根據(jù)國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布《新型冠狀病毒感染的肺炎實驗室檢測技術(shù)指南（第二版）》中未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料的操作可在生物安全二級（BSL-2）實驗室進行，實驗室定期采用氣化過氧化氫空間滅菌設(shè)備對實驗室空間內(nèi)、檢測設(shè)備內(nèi)外表面潛在病毒進行滅菌是十分必要，特別是肩負保護檢測人員安全的生物安全柜因其HEPA過濾器、風道及排風管道更無法使用傳統(tǒng)方法滅菌。目前已知的華中科技大學協(xié)和醫(yī)院、武漢市金銀潭醫(yī)院、青島一附院等醫(yī)院檢驗科人員在未接觸病人情況下發(fā)生感染。



三、標本運輸安全

根據(jù)國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布《新型冠狀病毒感染的肺炎實驗室檢測技術(shù)指南（第二版）》中國內(nèi)運輸要求：新型冠狀病毒毒株或其他潛在感染性生物材料的運輸包裝分類屬于A類，對應(yīng)的聯(lián)合國編號為UN2814，包裝符合國際民航組織文件Doc9284《危險品航空安全運輸技術(shù)細則》的PI602分類包裝要求；環(huán)境樣本屬于B類，對應(yīng)的聯(lián)合國編號為UN3373，包裝符合國際民航組織文件Doc9284《危險品航空安全運輸技術(shù)細則》的PI650分類包裝要求；通過其他交通工具運輸?shù)目蓞⒄找陨蠘藴拾�裝。
新型冠狀病毒毒株或其他潛在感染性材料運輸應(yīng)按照《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》（原衛(wèi)生部令第45號）辦理《準運證書》。

在新型冠狀病毒疫情期間，為保護檢驗人員安全，對用于樣本運輸?shù)臉颖巨D(zhuǎn)運箱在進入實驗室前盡可能采用紫外燈或臭氧傳遞窗滅菌對樣本運轉(zhuǎn)箱外表面進行滅菌，有條件的生物安全三級（BSL-3）實驗室也可采用帶有集成過氧化氫發(fā)生器的傳遞窗進行滅菌。筆者發(fā)現(xiàn)市面也有帶過氧化氫接口的生物安全型高壓蒸汽滅菌柜，以實現(xiàn)雙扉高壓蒸汽滅菌柜、過氧化氫傳遞窗雙功能。