產(chǎn)品名稱：草魚呼腸孤病毒3型PCR檢測試劑盒

英文名稱：Grass Carp Reovirus(GCRV)3RTPCR

規(guī)格：50T

技術(shù)原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）

發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應用，并逐步應用于臨床。

使用及效果：
將壓碎的一小片重量約在00 mg 左右的植物種子（約/4 黃豆大�。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm（或面積相當?shù)钠渌�形狀）的植物葉片直接加到新鮮配制的0. mL溶液A 中，95℃保溫0-5 分鐘，加入0. mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當于PCR 體積的/0）作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

技術(shù)特點：
準確可靠，臨床雙盲對照試驗＞000例，結(jié)果與金標準測序法比對，結(jié)果*性大于99%。
2高靈敏：可檢測低至0ng的人基因組DNA。
3快速：整個檢測流程只需3小時。
4簡便：試劑盒提供預混好的試劑，使體系配置操作簡便。
5防污染
6產(chǎn)品僅用于科研高特異性：雙重特異性組成，保證檢測結(jié)果的特異性和準確性引物與DNA互補鏈結(jié)合必需完全配對，才能延伸。探針特異性與所檢測基因的PCR產(chǎn)物配對，在延伸中產(chǎn)生熒光。

產(chǎn)品及特點：
. 即開即用，用戶只需要提供伴放線放線桿菌樣品。
2. 根據(jù)伴放線放線桿菌保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 產(chǎn)品僅用于科研本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。

注意事項：   
草魚呼腸孤病毒3型PCR檢測試劑盒
使用本試劑前請仔細閱讀本說明書全文。
2 操作時應盡量少說話，因口腔中也含有支原體，可能引起樣品污染，而造成假陽性；整個檢測過程中，反應體系的配制、樣本處理及加樣、PCR擴增應分區(qū)域進行，以避免交叉污染。
3 實驗時，試劑盒組分中的試劑使用前應充分融化并混勻（混勻時禁止激烈振蕩，只需要進行上下倒置多次進行混勻）。
4 反應管中加好所有的試劑后，應盡快上PCR儀進行擴增，以免形成過多的二聚體。
5細胞培養(yǎng)物中含有青霉素和鏈霉素等抗生物素不會影響本品的檢測結(jié)果。如果用戶需要進一步提高檢測靈敏度，建議細胞在不含青霉素和鏈霉鏈等抗生素中進行培養(yǎng)2-3天后送樣檢測。

PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=0-2g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=0-6g)水平。能從00萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。

(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板�？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
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運輸及保存：
低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、0×ROX（根據(jù)機型決定，具體見使用方法）。