上一期我們聊了期刊雜志的新要求，總結如下：
 

▶  不建議跑平行膠，因為平行膠和剝離膜，孵育體系，操作條件的不一致，影響定量的準確性，因此最好內參和目的蛋白要在同一張印跡膜上。

▶  選擇寬動態(tài)范圍的方法，確認信號強度與所上樣量之間的線性關系，例如用膠片做化學發(fā)光方法的動態(tài)范圍就很窄，不建議使用。

▶  強烈推薦使用總蛋白進行歸一化，因為看家蛋白容易受處理條件影響而發(fā)生變化，影響定量的結果，使用總蛋白定量更真實地反映目標蛋白表達量的變化。

▶  提交原始數據，例如：JBC，PLOS和CELL等雜志都要求要提供原始數據。
 

Azure公司除了有Sapphire雙模式多光譜激光成像系統(tǒng)可滿足需求， Azure600多功能分子成像系統(tǒng)也可幫助您獲得期刊雜志要求的Western Blot數據：

 

 

▶ Azure600標配有5個熒光光源，可同時在一張印跡膜上進行4通道熒光成像 ，同時也具有高靈敏化學發(fā)光檢測功能，靈敏度可達fg級

 

熒光Western Blot使用熒光基團標記的二抗進行檢測，膜上的靶標蛋白濃度與可見熒光信號強度呈線性關系，實現真實可靠的定量分析。熒光染料發(fā)射光譜不同，因此在一張印跡膜上可實現多個蛋白檢測。這樣目標蛋白和內參蛋白在同一張膜上，可以避免數據造假的情況發(fā)生，更容易被期刊雜志接收。

 

 

圖1：通過使用四種光譜不同熒光基團標記的二抗，可以同時檢測多達四種不同的蛋白。HeLa細胞裂解物上樣，Anti-Tubulin (550nm, 綠色), Anti-Actin (700nm紅色), Anti-GAPDH (800nm, 灰色),和Anti-Transferrin (490nm, 藍色)這四種蛋白同時成像，沒有交叉。

 

▶ Azure600近紅外采用激光光源， 激發(fā)強度大，單色性好，減少光泄漏，在更短的時間內達到更好的信噪比，Western Blot精準定量的金標準
 

 

▶ Azure600配合AzureRed總蛋白熒光染色劑可以做總蛋白歸一化和定量三個靶標蛋白，生成可以信賴的定量Western Blot數據

 

使用總蛋白歸一化，以校正泳道和樣品之間的差異。傳統(tǒng)的方法無法準確知道條帶灰度值和強度的變化是由于樣品的生物學變化引起的，還是由于上樣不一致性或樣品制備的差異引起的。總蛋白定量的優(yōu)勢如下：
 

★ 總蛋白比看家基因等內參的線性檢測范圍更寬；

★ 在整個實驗和系統(tǒng)中更加穩(wěn)定；

★ 能有效排除實驗條件和體系對結果的影響；

★ 更真實地反映目標蛋白表達量的變化。

 

圖2.總蛋白歸一化和定量三個靶標蛋白. Tubulin 紅色通道, Actin 藍色通道,GAPDH綠色通道, AzureRed/Total protein 用灰色表示
 

圖3.使用總蛋白對Tubulin信號進行歸一化糾正上樣誤差

 

▶Azure600標配9.1MP的高分辨CCD，動態(tài)范圍可達4.8OD，保證結果的準確性
 

圖4.過飽和檢測可防止定量誤差，相同的印跡膜分別使用膠片成像和Azure成像系統(tǒng)，Azure成像系統(tǒng)具有過飽和提醒，自動計算曝光時間以避免飽和

 

▶ Azure600可做彩色Marker與化學發(fā)光條帶的自動整合，分子量查看更直觀
 

 

▶ Azure600提供原始數據16bit的tiff圖給到期刊，這里的tiff原始數據是指未經裁剪，像素修改，對比度調整等任何操作的圖，保證結果的真實性和可靠性

 

Azure600除了進行熒光印跡膜，化學發(fā)光印跡膜檢測外，還可以進行普通凝膠成像，EMSA檢測，菌落篩選，小動物成像，植物成像等。

 

 

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