經(jīng)常有用戶反映，
細(xì)胞凍存與復(fù)蘇遇到了問題！
那如何讓細(xì)胞安心沉睡，
再滿血復(fù)活？
逍鵬生物的老司機(jī)為此做了總結(jié)。。。。

 選 好 細(xì) 胞 凍 存 液 是 基 礎(chǔ)

使用動(dòng)物血清常常會(huì)遇到很多問題，例如：病毒感染、其他動(dòng)物源的污染。使用無血清制品培養(yǎng)與凍存細(xì)胞，可以消除這方面的隱患。此外，無血清凍存液可以確保細(xì)胞在化學(xué)成分固定的條件下生長，更進(jìn)一步確保細(xì)胞凍存時(shí)的條件穩(wěn)定

慢 慢 做 冷 凍

若您養(yǎng)的是貼壁細(xì)胞，請(qǐng)先將細(xì)胞消化下來；若是懸浮細(xì)胞，請(qǐng)直接按以下步驟進(jìn)行：
1. 以200-300g離心3分鐘，棄去上清，收集細(xì)胞。
2. 用BI無血清凍存液將細(xì)胞重懸（不需回溫），將細(xì)胞密度調(diào)整為3~5x10⁶ cells/ml，添加到凍存管中（一般每管1ml）。
3. 建議將含有細(xì)胞懸液的凍存管放進(jìn)漸進(jìn)降溫盒或是保溫杯中，置于-80°C冰箱6小時(shí)以上或是過夜（或不需要程序降溫)。
4. 將凍存管迅速移到液態(tài)氮中保存。
5. 凍存24小時(shí)后，建議檢測(cè)細(xì)胞存活率。

 迅 速 做 復(fù) 蘇

1. 將細(xì)胞凍存管由液態(tài)氮中取出，置于室溫回溫，不用水浴溶解。此時(shí)可準(zhǔn)備新鮮培養(yǎng)基、無菌15ml離心管、培養(yǎng)瓶。
2. 在生物安全柜內(nèi)，直接以少量培養(yǎng)基反復(fù)沖融，使細(xì)胞團(tuán)塊化凍。
3. 先在無菌15ml離心管中加入5ml培養(yǎng)基，再將化凍的細(xì)胞懸液加入離心管中。以200~300g，3分鐘離心收集細(xì)胞。
4. 倒去上清液，重懸細(xì)胞，移到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

 hESC were frozen in CryoStem and were thawed  into NutriStem hESC XF Medium
（H1 hESC BGO1V/hOG cells）

1 hour post-thawing

Day 1 Post-thawing

Day 4 Post-thawing
yoyo~~ BI 凍 存 液 來 一 套

不含動(dòng)物成份
細(xì)胞凍存與復(fù)蘇后，平均活細(xì)胞回收比例超過90%

Serum-Free Cell Freezing Medium
無血清細(xì)胞凍存液，貨號(hào): 05-065-1A/B
無血清培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)該使用無血清的凍存液保存，以保持無血清培養(yǎng)體系的完整。本凍存液不含蛋白及動(dòng)物組分，主要成分為DMSO和甲基纖維素。

Cryostem ACF Freezing Media
無血清干細(xì)胞凍存液（Optimized for Stem Cell），貨號(hào): 05-710-1B/E
CryoStem對(duì)所有種類的細(xì)胞都有非常好的凍存效果，該產(chǎn)品經(jīng)過驗(yàn)證，特別適用于人胚胎干細(xì)胞和人原代細(xì)胞的凍存。用CryoStem凍存融解后，細(xì)胞表現(xiàn)出極佳的復(fù)蘇率、生長活性、貼壁性和傳代能力。

MSC Freezing Medium
無血清間充質(zhì)干細(xì)胞凍存液，貨號(hào): 05-712-1B/E
即用型溶液，特別適用于人類間充質(zhì)干細(xì)胞凍存，用MSC凍存液凍存融解后，細(xì)胞表現(xiàn)出極佳的復(fù)蘇率、生長活性。

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